2019 Fiscal Year Research-status Report
メラノコルチン１型受容体機能低下の膵臓発がんへの関与
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18K07081
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| Research Institution | National Cancer Center Japan |
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Principal Investigator |
高橋 真美 国立研究開発法人国立がん研究センター, 研究所, ユニット長 (90214973)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 膵臓がん / メラノコルチン受容体 / SNPs / 細胞株 / マウスモデル |
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| Outline of Annual Research Achievements |
メラノコルチン受容体(MCR)のうち、MC1Rは色素合成や抗炎症・免疫に関与しており、生体防御異常に関わっている。本研究では、MC1Rの機能低下と膵発がんとの関わりを明らかにすることを目的としている。H31(R1)年度は、以下について検討を行った。
日本人膵がん症例の手術検体やゼノグラフト組織から樹立した培養細胞株及び連携研究者より入手した膵がん培養細胞株よりDNAを抽出し、PCR法によりMC1R遺伝子を増幅して、ダイレクトシークエンス解析によりSNPs/点突然変異の有無を調べた。その結果、日本人膵がん患者からは日本人に多い２つのタイプのSNPsが検出された。ホモで１種類またはヘテロで２種類のSNPsが検出され割合が多く、両アレルともSNPsを有する割合が高いと考えられた。ヘテロで２種類の場合に片側ずつにSNPsがあることを確認するためにMC1R遺伝子のcDNAのクローニングを試行中である。
マウス膵臓発がんモデルにおいて発生した腫瘍から樹立した野生型Mc1rの膵臓がん細胞株を、Mc1r変異を有するMc1r<e/e>マウスとその野生型マウス移植し、宿主側のMc1r機能低下が腫瘍の増殖や炎症細胞の浸潤等に及ぼす影響を膵臓への同所移植モデルにて検討した。その結果、どの宿主でも移植腫瘍は膵臓において順調に増殖し、野生型Mc1rの膵臓がん細胞株の増殖に対する、宿主のMc1r変異の有無の明らかな影響は認められなかったが、肺への微小転移が野生型に比べ、Mc1r変異マウスで多い傾向が見られた。また、マウス膵臓発がんモデルにおけるMc1r変異の影響について検討するためにマウスを繁殖中であり、これまでのところ、Mc1r変異ヘテロマウスで発がん個体が数匹得られているが、野生型及びホモマウスの出生数が少なく、匹数を増やして検討する必要がある。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
SNPs/点突然変異を有するMC1R遺伝子のクローニングがうまくいかず、機能解析が遅れている。また、マウス実験では、生まれるマウスのジェノタイプにばらつきがあり、有意な実験結果を得るには繁殖数を増やす必要があり、時間がかかっている。
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| Strategy for Future Research Activity |
これまでに樹立・入手できた多くの細胞株のMC1RのSNPs/点突然変異の有無と発現レベルのパネルを作成し、欧米人由来の既存膵がん細胞株との遺伝子発現パターンや細胞形態・増殖性・浸潤能等の性状比較を行う。また、野生型MC1Rを有するヒト正常膵管由来細胞株や膵がん細胞株に変異型MC1R遺伝子を導入して高発現させ、その機能解析を行う。さらに、免疫不全マウスに移植して増殖への影響を調べる。
MC1R機能低下型変異を有するマウスを膵発がんモデルマウスと交配し、MC1R機能低下が発がんや浸潤・転移に及ぼす影響を明らかにする。また、Mc1r変異を有するマウス膵臓腫瘍からがん細胞株を樹立し、野生型マウスに移植して、野生型Mc1rの膵がん細胞株の増殖形態との比較を行う。
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| Causes of Carryover |
日本人膵がん症例由来の培養細胞株の樹立や連携研究者からの入手に時間がかかった。また、SNPs/点突然変異を有するMC1R遺伝子のクローニングに手間取り、機能解析が遅れているため、予定より支出が少なかった。
日本人の膵がん症例由来の培養細胞株を多数得たため、当該受容体遺伝子配列の解析の完了に費用がかかる。また、当該受容体のSNPsを有するヒトがん細胞の移植モデルや当該受容体変異マウスを用いて腫瘍増殖や発がんへの影響を検討する動物実験にかなりの費用が必要となることから、これらの研究計画の完遂のために繰り越し分を充てる計画である。
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Research Products
(1 results)
