Identification of long non-coding RNAs that regulate HBV replication

2020 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 18K07161
• Research Institution: Fujita Health University
• Principal Investigator: 西辻 裕紀 藤田医科大学, 医学部, 講師 (20573661)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: HBV / lncRNA

Outline of Annual Research Achievements

本研究では、HBV複製に関係するlncRNAの同定を試みた。
HBV Xタンパク質と結合するlncRNAを同定するため、HAとmycタグを付加したXタンパク質をHepG2細胞に発現させ、HA抗体、myc抗体で免疫沈降を行い、X遺伝子と結合するlncRNAを次世代シークエンスで同定した。その結果、一つのmiRNAがX遺伝子と強く結合した。
このmiRNAがX遺伝子の機能に影響するかどうかを評価するため、このmiRNAに対するmimic及びinhibitorを用いて、その機能評価を行った。その結果、mimic処理を行った細胞では、Xタンパク質のHBV coreプロモーターの転写活性化能が抑制された。一方、inhibitorを処理した細胞では、Xタンパク質のHBV coreプロモーターの転写活性化能が促進された。以上の結果より、今回同定したmiRNAはHBV Xタンパク質を抑制することが示唆された。次に、HBV感染におけるmiRNAの機能を評価した。その結果、mimic処理を行った細胞では、HBVの感染が抑制された。一方、inhibitorを処理した細胞では、HBVの感染が促進された。この結果より、今回同定したmiRNAはHBV感染も抑制することが示唆された。今回同定したmiRNAの作用機序を検討するために、mimicまたはinhibitorを用いて、Xタンパク質の発現を評価した。その結果、mimic処理した細胞ではXタンパク質の量が減少し、inhibitorを処理した細胞では、Xタンパク質の量が増加した。その結果、今回同定したmiRNAはXタンパク質の安定に関与することが示唆された。

Research Products

• [Journal Article] N-Terminal PreS1 Sequence Regulates Efficient Infection of Cell-Culture-Generated Hepatitis B Virus. (2021)
  • Author(s): Murayama A, Yamada N, Osaki Y, Shiina M, Aly HH, Iwamoto M, Tsukuda S, Watashi K, Matsuda M, Suzuki R, Tanaka T, Moriishi K, Suzuki T, Nishitsuji H, Sugiyama M, Mizokami M, Shimotohno K, Wakita T, Muramatsu M, Liang TJ, Kato T.
  • Journal Title: Hepatology Volume: 73 Pages: 520-532
  • DOI: 10.1002/hep.31308
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Identification of Two Critical Neutralizing Epitopes in the Receptor Binding Domain of Hepatitis B Virus preS1 (2020)
  • Author(s): Yato K, Onodera T, Matsuda M, Moriyama S, Fujimoto A, Watashi K, Aizaki H, Tanaka T, Moriishi K, Nishitsuji H, Shimotohno K, Tamura K, Takahashi Y, Wakita T, Muramatsu M, Kato T, Suzuki R.
  • Journal Title: Journal of virology Volume: - Pages: -
  • DOI: 10.1128/JVI.01680-20.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Modulation of hepatitis B virus infection by epidermal growth factor secreted from liver sinusoidal endothelial cells. (2020)
  • Author(s): Chen SW, Himeno M, Koui Y, Sugiyama M, Nishitsuji H, Mizokami M, Shimotohno K, Miyajima A, Kido T.
  • Journal Title: Scientific reports Volume: 10 Pages: -
  • DOI: 10.1038/s41598-020-71453-5
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Orchestration of Intracellular Circuits by G Protein-Coupled Receptor 39 for Hepatitis B Virus Proliferation. (2020)
  • Author(s): Goto K, Nishitsuji H, Sugiyama M, Nishida N, Mizokami M, Shimotohno K.
  • Journal Title: International Journal of Molecular Sciences Volume: 21 Pages: -
  • DOI: 10.3390/ijms21165661.
  • Peer Reviewed / Open Access