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2018 Fiscal Year Research-status Report

新規標的分子PLEKHA5を介したMet特異的ながん悪性化シグナル機構の解明

Research Project

Project/Area Number 18K07219
Research InstitutionSasaki Foundation

Principal Investigator

山口 英樹  公益財団法人佐々木研究所, 附属研究所, 部長(移行) (10345035)

Project Period (FY) 2018-04-01 – 2021-03-31
KeywordsPLEKHA5 / Met / リン酸化 / シグナル伝達
Outline of Annual Research Achievements

MetはHGFをリガンドとする受容体型チロシンキナーゼであり、様々ながんで異常な活性化がみられる。Metは特に浸潤転移、再発、治療抵抗性などがん悪性化に深く関わることから、特有の下流シグナルが存在すると考えられる。申請者はMet遺伝子増幅を持つがん細胞のリン酸化プロテオミクス解析により、機能未知なタンパク質PLEKHA5を同定した。先行研究により、PLEKHA5はMetの下流でリン酸化され、Met依存的ながん細胞の悪性化に関わることを見出した。本研究では、PLEKHA5の詳細な機能解析により、がん悪性化を担うMet特異的なシグナル伝達機構を解明することを目的とする。具体的には、MetによるPLEKHA5リン酸化の機序と意義、PLEKHA5が関わるMet下流シグナル、マウスモデルや臨床サンプルを用いたPLEKHA5の生理機能及び病理学的機能の解析を行う。
今年度は、先ずデータベース解析と変異体の作製により、PLEKHA5のMetによるリン酸化部位を同定し、リン酸化特異的抗体の作製に成功した。現在、リン酸化変異体も利用してPLEKHA5のチロシンリン酸化のMet特異性、細胞内の局在や機能ついて詳細に検討を行っている。
さらに、Met依存的ながん細胞よりTAP法を用いてPLEKHA5を精製し、結合タンパク質の探索を行った。SDS-PAGEと銀染色により解析を行った結果、複数の結合タンパク質のバンドを検出し、質量分析によりこれらのタンパク質を同定した。現在、その結合の特異性や意義の検討を進めている。さらにPLEKHA5のリン酸化の有無による結合や活性状態の変化等も検討する。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

本研究では、MetによるPLEKHA5のチロシンリン酸化の機序と意義、PLEKHA5が関わるMet下流シグナル伝達経路の解明、マウスモデルや臨床サンプルを用いたPLEKHA5の生理機能及び病理機能の解析を行うことを目指している。今年度は、PLEKHA5のリン酸化部位を決定し、リン酸化特異的抗体の作製に成功した。またPLEKHA5の結合タンパク質を複数同定することができた。これらはPLEKHA5の分子機能の解明に大きく寄与する成果であることから、本研究は順調に進んでいると考えられる。

Strategy for Future Research Activity

今後はさらに、MetによるPLEKHA5リン酸化の機序と意義の解明を進めていく。また抗体アレイやDNAマイクロアレイなどを用いて、MetとPLEKHA5の発現抑制により共通して発現や活性化が変化するシグナル伝達経路の網羅的解析などを行い、結合タンパク質の解析と合わせて、PLEKHA5が関与するシグナル機構の全容解明を試みる。さらに、胃がんの臨床サンプルを用いて免疫組織化学染色を行い、PLEKHA5の発現、リン酸化と臨床病理学的特徴及び予後との相関、Metの発現やリン酸化、遺伝子増幅との相関を検討する。またノックアウトマウスを用いた生理機能の解明も検討する。

  • Research Products

    (8 results)

All 2018 Other

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results,  Open Access: 1 results) Presentation (4 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Identification and characterization of a novel adenomatous polyposis coli mutation in adult pancreatoblastoma.2018

    • Author(s)
      Yamaguchi S, Fujii T, Izumi Y, Fukumura Y, Han M, Yamaguchi H, Akita T, Yamashita C, Kato S, and Sekiya T
    • Journal Title

      Oncotarget

      Volume: 9 Pages: 10818-10827

    • DOI

      10.18632/oncotarget.24017.

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Aberrant alternative splicing of RHOA is associated with loss of its expression and activity in diffuse-type gastric carcinoma cells.2018

    • Author(s)
      Miyamoto S, Nagamura Y, Nakabo A, Okabe A, Yanagihara K, Fukami K, Sakai R, and Yamaguchi H
    • Journal Title

      Biochem. Biophys. Res. Comm.

      Volume: 495 Pages: 1942-1947

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2017.12.067.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Intracellular cholesterol level regulates sensitivity of glioblastoma cells against temozolomide-induced cell death by modulation of caspase-8 activation via death receptor 5-accumulation and activation in the plasma membrane lipid raft.2018

    • Author(s)
      Yamamoto Y, Tomiyama A, Sasaki N, Yamaguchi H, Shirakihara T, Nakashima K, Kumagai K, Takeuchi S, Toyooka T, Otani N, Wada K, Narita Y, Ichimura K, Sakai R, Namba H, and Mori K
    • Journal Title

      Biochem. Biophys. Res. Comm.

      Volume: 495 Pages: 1292-1299

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2017.11.113.

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] びまん性胃癌におけるRhoAのスプライシング異常とそれに伴う発現および活性の低下2018

    • Author(s)
      宮本真吾、中坊彩花、深見希代子、柳原五吉、堺隆一、山口英樹
    • Organizer
      第77回癌学会学術総会
  • [Presentation] マルチカラー蛍光イメージングによるスキルス胃癌腹膜播種機構の解析2018

    • Author(s)
      中坊彩花、深見希代子、山口英樹
    • Organizer
      第77回癌学会学術総会
  • [Presentation] びまん性胃癌細胞にみられたRhoAのスプライシング異常とそれに伴う発現および活性の消失2018

    • Author(s)
      宮本真吾、中坊彩花、深見希代子、柳原五吉、堺隆一、山口英樹
    • Organizer
      第91回日本生化学会大会
  • [Presentation] スキルス胃癌と間質線維芽細胞の直接的な相互作用に関わる分子機構の解明2018

    • Author(s)
      宮本真吾、堺隆一、山口英樹
    • Organizer
      第27回 日本がん転移学会学術集会・総会
  • [Remarks] 公益財団法人佐々木研究所附属佐々木研究所ホームページ

    • URL

      http://www.sasaki-institute.org/

URL: 

Published: 2019-12-27  

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