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2019 Fiscal Year Research-status Report

細胞ディスプレイ法によるがん特異的TCR の親和性成熟とその創薬への応用

Research Project

Project/Area Number 18K07285
Research InstitutionNagoya City University

Principal Investigator

太田 里永子  名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 研究員 (30452460)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 葛島 清隆  愛知県がんセンター(研究所), 腫瘍免疫応答研究分野, 分野長 (30311442) [Withdrawn]
今井 優樹  名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 講師 (30440936)
岡村 文子 (出町文子)  愛知県がんセンター(研究所), 腫瘍免疫制御TR分野, 主任研究員 (10546948)
Project Period (FY) 2018-04-01 – 2022-03-31
KeywordsT細胞受容体 / 親和性の成熟 / がん特異的TCR
Outline of Annual Research Achievements

TCR(T細胞受容体)の親和性の成熟をin vitroで行う方法として、ファージディスプレイ法があるが、もともとTCRは抗体に比べて、抗原との親和性が低く、そのため、抗原へのきわめて高精度な特異性があっても、一価での親和性が低いTCRでは、ファージディスプレイ法による親和性の成熟は困難であった。
そこで、ファージディスプレイ法に代わる新たな親和性の成熟方法として、「293T細胞ディスプレイ法」を考案した。
がん抗原hTERTに対する野生型のTCRα鎖とβ鎖の抗原認識部位(相補性決定領域、CDR)に、最大5個のアミノ酸にランダムに変異を導入した。αについては7個、βについては9個のライブラリーを作成した。ライブラリーサイズは、理論的なDNAの多様性に匹敵するTCR遺伝子ライブラリーが得られた。
これらのライブラリーを、293T-CD3細胞に遺伝子導入し、MHCテトラマー試薬で検出したところ、MHCコントロールテトラマー試薬と比較して、数パーセントだが、強く染色されるものがβ鎖のCDR1とCDR2のライブラリーに検出された。このことから、このTCRでは、β鎖のCDR1とCDR2に、抗原とのアフィニティを決定する部分があることが示唆された。
次に、MHCテトラマー試薬に強く染色される細胞群を、セルソーターを用いて分取し、クローニングを行い、反応性のよいクローンを複数個得た。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

高親和性のTCR受容体を取得するために、この実験で鍵となるは、良質なTCR遺伝子ライブラリーの構築である。今年度は、ライブラリーの構築方法について様々な改良を試みて、ライブラリーサイズが理論値に匹敵する大きさのライブラリーを構築することができた。
また、TCRを大腸菌リコンビナントタンパク質として作成する準備を行い、野生型のTCRについて、たんぱく質の発現とMHCに対する反応性を確認できた。

Strategy for Future Research Activity

得られたクローンについて、遺伝子解析を行い、高親和性のTCRの遺伝子配列にどうのような傾向がみられるか検討する。得られたクローンのTCRを大腸菌のリコンビナントタンパク質として作成し、抗原との結合力をBiacoreにて評価する。

Causes of Carryover

計画していた一部の実験が行えず、試薬を購入しなかったため。

  • Research Products

    (2 results)

All 2020 2019

All Presentation (2 results)

  • [Presentation] 新規活性型カルボキシペプチダーゼRの一次構造予測2020

    • Author(s)
      河村 剛至、太田 里永子 、山本 博之、今井 優樹、安野 伸浩
    • Organizer
      日本薬学会第140年会
  • [Presentation] Expression of complement anaphylatoxin receptor in the various subsets of dendritic cells2019

    • Author(s)
      Masaki Imai, Rieko Ohta, Sayuri Yamazaki
    • Organizer
      第48回日本免疫学会学術集会

URL: 

Published: 2021-01-27  

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