Production of monoclonal antibodies using B cells derived from patients and their clinical application

2018 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 18K07293
• Research Institution: Kanazawa University
• Principal Investigator: 高松 博幸 金沢大学, 医学系, 講師 (70401932)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: モノクローナル抗体 / HLA抗原 / リンパ系腫瘍

Outline of Annual Research Achievements

これまでに作製に成功した抗HLA-B61とA24モノクローナル抗体に加えて, 抗HLA-B54抗体と抗HLA-DR4抗体産生細胞をサイトカインカクテルで刺激した患者末梢血から細胞アレイを用いて分離し、その細胞から抽出したDNAを用いて遺伝子組換えを行い、抗HLA-B54抗体と抗HLA-DR4抗体遺伝子をクローニング、抗体発現ベクターを構築し、そのトランスフェクションによってモノクローナル抗体産生細胞候補を作製した。ELISAを用いた系では、HLA-B54とDR4抗原に結合している可能性を見いだしたが、その特異性を現在確認している。同時に、細胞アレイで分離した細胞由来の抗体遺伝子を複数認めたため、再度クローニングを行っている。一方、抗HLA-B61モノクローナル抗体を用いて免疫抑制療法が奏効しやすい患者の診断が可能になるため（HLAロスをフローサイトメトリーで検出する）、その抗HLA-B61モノクローナル抗体を大量に作製できるように動物細胞大量培養システムを構築し、モノクローナル抗体の大量作製を行った。また、長期間分子学的完全寛解(molecular complete remission: mCR)を維持している多発性骨髄腫患者血清中には種々の自己抗体が検出されることを、これまでに蛋白質アレイを用いた網羅的解析で明らかにした。その自己抗体が認識する抗原が正常血液細胞では発現がなく、骨髄腫細胞に発現していることをウエスタンブロット法を用いて確認した。さらに、その抗原の発現は骨髄腫細胞の悪性度（病期や染色体異常）と関連する可能性も見いだした。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

細胞アレイでは複数の抗体遺伝子が分離されてきたため、細胞アレイに複数の細胞が入った、もしくは顕微鏡で細胞をキャプチャーする際に複数の細胞を回収したと考えられる。当初は、シングル細胞しか細胞アレイには入らないと考えていたため、クローニングを複数回行っているために、進捗がやや遅れている。

Strategy for Future Research Activity

細胞アレイによる抗体産生B細胞の分離を確実・迅速に行えるように共同研究を行っている富山大学免疫学教室の連携を深めていく予定である。それにより、当初予定していた「長期間分子学的完全寛解(molecular complete remission: mCR)を維持している多発性骨髄腫患者血清中に検出される骨髄腫細胞特異的抗体を同定し、そのモノクローナル抗体作製も前記した抗HLAモノクローナル抗体に加えて実施する予定である。作製したモノクローナル抗体の生物学的機能をin vitroの系で確認する計画である。

Causes of Carryover

2019年3月に購入した試薬が予定よりも安価に購入できたために、10820円の次年度繰越金が生じた。その繰越金は次年度の物品費に充てる予定である。