妊婦からのB群溶血性レンサ球菌（GBS）の検出－全自動遺伝子解析装置への応用－

2018 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 18K07472
• Research Institution: Fukushima Medical University
• Principal Investigator: 三浦 里織 福島県立医科大学, 医学部, 助手 (00803660)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 豊川 真弘 福島県立医科大学, 医学部, 教授 (10645443) ; 志村 浩己 福島県立医科大学, 医学部, 教授 (40303416)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: B群溶血性レンサ球菌（GBS） / 新生児GBS感染症 / ペニシリン低感受性GBS

Outline of Annual Research Achievements

本研究の目的は、より高感度かつ迅速なB群溶血性レンサ球菌（GBS）ユニバーサルスクリーニングの確立とペニシリン低感受性GBS（PRGBS）の検出をモニタリングすることである。
平成30年度は、当院で現在用いられているGBSユニバーサルスクリーニング（GBS増菌培養法）によって検出されたGBS菌株を収集してきた。また、妊婦由来以外のGBS菌株の収集も実施している。収集したGBS菌株の菌種同定確認として、MALDI-TOF MS を行った。
さらに、収集した妊婦由来GBS 70菌株について、セフチジブテン（CETB）ディスク拡散法でペニシリン低感受性GBSスクリーニングを実施した。この結果、PRGBS疑いの菌株について、今後、分子生物学的解析を進めていく方針である。
また、妊婦サンプルや増菌後の培地から直接DNAを抽出し、リアルタイムPCRでGBSを検出するために、サンプルからのDNA抽出を進めている。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

GBS菌株収集については現在、継続的に実施しており、菌株解析は徐々に進行している。収集したGBS菌株の菌種同定確認として、MALDI-TOF MS を実施している。収集したGBS菌株については、セフチジブテン（CETB）ディスク拡散法によって、ペニシリン低感受性GBSのスクリーニング検査を実施した。CETBディスク拡散法で阻止円20mm未満であった菌株については、遺伝子解析のためにDNA抽出を行った。これらの菌株についてはMIC値測定（微量液体希釈法）および血清型別を確認する。また、他施設の協力を得て、より多数のGBS菌株を収集する方向で進めている。収集できた菌株については引き続き解析を行っていく。
一方、妊婦スワブ検体、GBS増菌培地からのリアルタイムPCRについては、それぞれの検体からのDNA抽出作業を進めているが、リアルタイムPCRをおこなうに至っていない。

Strategy for Future Research Activity

継続的にGBS菌株収集を行い、菌株解析を実施していく。具体的にはCETBディスク拡散法によるPRGBSスクリーニング検査を実施し、そこでペニシリン低感受性GBS疑いのある菌株について、MIC値測定（微量液体希釈法）、血清型別確認、、分子生物学的解析（PBP2X遺伝子のシークエンス解析、アミノ酸置換部位の決定）を行う。
妊婦スワブ検体、GBS増菌培地からリアルタイムPCRで検出する系を確立し、GBSユニバーサルスクリーニング（GBS増菌培養法）でのGBS検出と比較検討を行う。現段階では妊婦スワブからの適切にDNA抽出を行うことが困難な状況であり、これを解決することが、当面の目的となる。

Causes of Carryover

平成30年度は菌株収集に時間を要した。今年度は他施設の協力を得て、収集できる菌株数を増加する方向で進めている。
今後、菌株の分子生物学的解析やリアルタイムPCRの構築に必要となる試薬代で研究費を使用する。また、それらの成果を学会発表、論文投稿するための経費を必要とする。