2018 Fiscal Year Research-status Report
The establishment of drug screening system for polyglutamine disease using disease specific iPSCs
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18K07539
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| Research Institution | Aichi Medical University |
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Principal Investigator |
丹羽 淳一 愛知医科大学, 医学部, 准教授 (50378022)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
岡田 洋平 愛知医科大学, 医学部, 准教授 (30383714)
伊藤 卓治 愛知医科大学, 医学部, 特別研究助教 (30794151)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 疾患特異的iPS細胞 / ポリグルタミン病 / 創薬スクリーニング / 球脊髄性筋萎縮症 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
(1)解析に用いるSBMAモデル細胞の作製：ヒト骨格筋細胞株であるHu5/E18に、PiggyBac vectorを用いてHAタグを付加した全長AR24Q（正常型）, AR55Q, AR97Q（変異型）を導入し、SBMAモデルとなり得る筋芽細胞（変異型/野生型ARの定常発現株）を作成した。ウマ血清存在下で筋管へと分化誘導し、骨格筋における表現型を確認した。同様にマウス運動ニューロン細胞株であるNSC34細胞へもHAタグを付加した全長AR24Q（正常型）, AR55Q, AR97Q（変異型）を導入し、疾患モデル細胞を作製した。
(2) 内在性伸長ポリグルタミン鎖を可視化し得る新規プローブの作成：単独では凝集体を形成しない正常ポリグルタミン鎖（正常CAGリピート数）をもつtruncate AR24QとEmGFPの融合タンパク （tAR24Q-EmGFP）を、伸長ポリグルタミン鎖をもつ全長AR（AR-97Q）とともにHEK293T細胞に導入し、全長ARによる凝集体形成を可視化し得ることを確認した。現在、伸長ポリグルタミン鎖をより効率的に可視化し得る新たなプローブの作成を進めている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
tAR24Q-EmGFPによる伸長ポリグルタミン鎖の可視化が可能なことを確認できており、より効率的に凝集体を可視化し得るプローブの作成を進めている。また、プローブを評価するための、AR24Q, 55Q, 97Qを導入した疾患モデル細胞の作成を進めており、概ね順調に進捗していると考えられる。
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| Strategy for Future Research Activity |
作製した疾患モデル細胞を用いて、tAR24Q-EmGFPおよび新規プローブの評価を進めていく予定である。
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| Causes of Carryover |
効率的な研究費の使用により、次年度使用額が生じた。翌年度分と合わせて、実験試薬や実験器具等の消耗品の購入、研究技術員の雇用等にあてる予定である。
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