Biomarker discovery trial for CRP-negative Juvenile idiopathic arthritis

2020 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 18K07797
• Research Institution: Kyoto Prefectural University of Medicine
• Principal Investigator: 秋岡 親司 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (60598093)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: サイトカイン発現

Outline of Annual Research Achievements

若年性特発性関節炎の乾癬性関節炎型および付着部炎関連関節炎型の半数は、血清C反応性タンパク値（CRP）が上昇しないため、炎症性疾患が疑われず、診断に至らない例が多い。一方、TNF-aおよびIL-17に対する抗体療法が有効であることから、これら疾患の炎症病態にはTNF-aおよびIL-17が関与すると考えられる。それらを根拠に、若年性特発性関節炎の乾癬性関節炎型および付着部炎関連関節炎型患者血清にはTNF-aおよびIL-17の発現に関する分子が存在するとの仮説を立て、それら分子の探索を行っている。
遅れていたIL-17A遺伝子座におけるレポーター(ルシフェラーゼ)遺伝子のノックイン細胞株を、TNF-aの場合と同様に、CRISPER/Cas9を用いた遺伝子編集の技術を使って作成、シングルセルクローニングを経て２株樹立した。この作成した内因性のIL-17遺伝子発現を検出するレポーター（ルシフェリン）遺伝子ノックインヒト単球細胞株HL-60を用い、血清CRP陰性の患者由来血清のレポーター発現を、TNF-aの場合と同じようにin vitro cell cultureシステムで調べた。やはり血清によるレポーター発現は、HL-60の内因性発現を有意に抑制した。血清中にはサイトカインを標的にあるいは全般的に転写・翻訳過程を抑制する分子が存在する可能性が示唆された。一方、血清からフォスファチジルセリン親和性を利用してマグネティックビーズを用いて抽出した一部のエキソソームは、TNF-aにおいてレポーター発現を変化させた。ただしその変化は由来血清のCRPの陽性・陰性に関連なかった。IL-17発現に関しては現時点で有意に発現亢進を示すエキソソームは見つかっていない。現在引き続き、単球細胞におけるTNF-a遺伝子およびIL-17遺伝子発現を転写・翻訳レベルで特異的に変化させる分子の検索を行っている。