2020 Fiscal Year Annual Research Report
Establishing the genetic basis for tailor-made treatment of pediatric acquired demyelinating syndrome
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18K07821
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
石崎 義人 九州大学, 大学病院, 特別教員 (20572944)
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2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | ヒト多能性幹細胞 / 脳オルガノイド |
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| Outline of Annual Research Achievements |
エキソーム解析による責任遺伝子の同定については、炎症性疾患患者から3名を選択し、エキソーム解析（HiSeq2000, Illumina社）を行った。アミノ酸置換を伴う変異については複数の機能予測プログラムを元に遺伝学的重要性を評価し、常染色体劣性遺伝で複合ヘテロ変異を想定して候補遺伝子の絞り込みを行った。
iPS細胞については、患者3名から分離した末梢血単核球を用いてセンダイウイルスベクター（CytoTune-iPS 2.0, DNAVEC）でSOX2(SRY-related HMG box 2)遺伝子、KLF4(Kruppel-like factor 4)遺伝子、Oct4(octamer-binding transcription factor 4)遺伝子、Myc遺伝子を導入し作成した。作成したiPS細胞に関しては、形態学的観察と幹細胞マーカー（NANOG, OCT3/4, SSEA4, TRA1-60）による未分化性維持について確認した。細胞分化マーカーを用いて三胚葉への分化は確認できたが、マウスを用いた奇形種確認は実施できていない。
神経細胞への分化を確認した後に、B27サプリメントとLグルタミンを添加した条件で長期に培養することで、脳オルガノイドの形成することに成功し、NeuNおよびGFAPの発現を確認した。細胞内カルシウムイメージング法を用いて、神経細胞の活動を可視化することも可能になった。
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[Journal Article] GNAO1 organizes the cytoskeletal remodeling and firing of developing neurons2020
Author(s)
Akamine Satoshi,Okuzono Sayaka,Yamamoto Hiroyuki,Setoyama Daiki,Sagata Noriaki,Ohgidani Masahiro,Kato Takahiro A.,Ishitani Tohru,Kato Hiroki,Masuda Keiji,Matsushita Yuki,Ono Hiroaki,Ishizaki Yoshito,Sanefuji Masafumi,Saitsu Hirotomo,Matsumoto,..,Sakai Yasunari,Ohga Shouichi
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Journal Title
The FASEB Journal
Volume: 34
Pages: 16601～16621
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] De novo p.G696S mutation in COL4A1 causes intracranial calcification and late-onset cerebral hemorrhage: A case report and review of the literature2020
Author(s)
Kinoshita Keishiro,Ishizaki Yoshito,Yamamoto Hiroyuki,Sonoda Motoshi,Yonemoto Kousuke,Kira Ryutaro,Sanefuji Masafumi,Ueda Akihiko,Matsui Hirotaka,Ando Yukio,Sakai Yasunari,Ohga Shouichi
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Journal Title
European Journal of Medical Genetics
Volume: 63
Pages: 103825～103825
DOI
Peer Reviewed
