Identifying and analyzing biological characteristics of rhabdoid tumor stem cells to establish new treatment

2020 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 18K07824
• Research Institution: Kyoto Prefectural University of Medicine
• Principal Investigator: 勝見 良樹 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 特任助教 (00808496)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 家原 知子 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (20285266) ; 桑原 康通 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (30590327) ; 菊地 顕 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 特任助教 (40453104)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: ラブドイド腫瘍 / がん幹細胞

Outline of Annual Research Achievements

A. Sphere細胞：ラブドイド幹細胞として、ヒトラブドイド腫瘍細胞株であるKP-MRT-NS（NS）を幹細胞培養用培地で培養し、sphere形成された浮遊細胞のみを回収した。Sphere細胞は従来のNS細胞株とその発現についての差異をqPCRにおいて比較したところ、sphere細胞はSurvivin、FOXM1、CD44において有意差を認めた。
B. Hoechst33342：ラブドイド幹細胞として、ヒトラブドイド腫瘍細胞株であるG401にHoechst33342（HC）染色を行い、Sony Cell sorter SH800を用いてHC陽性細胞およびHC陰性細胞（＝幹細胞）を各々回収した。HC染色の妥当性はVerapamilによるABCG2抑制によってあわせて検証した。回収したHC陽性および陰性細胞を回収した幹細胞性の評価としてqPCRを用いて発現解析を行ったところ、Survivin、CD44においてsphere細胞にて検証した時と同様の結果を示した。一方、FOXM1においては逆の結果となった。
C. 増殖性：B実験において回収したHC陽性および陰性細胞を同細胞数で96wellに撒き増殖性について検証した。幹細胞であるHC陰性細胞はHC陰性細胞に比べ有意に増殖性を示した。
D. 造細胞性（マウスへの一次移植）：B実験において回収したHC陽性および陰性細胞を75-75000個で段階希釈してヌードマウスに移植した。初回および2回目の検証では陽性細胞・陰性細胞ともに造腫瘍性を認めなかった。
E. G401細胞から回収したHC陽性細胞と陰性細胞を用いてRNA-seq解析を行った。その結果、ABCG2だけでなく複数の遺伝子で有意な発現の差異がみられたため、今後「ラブドイド幹細胞におけるこれら遺伝子の意義」について追加検証していく予定である。