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2018 Fiscal Year Research-status Report

細胞骨格蛋白の異常によるネフローゼ発症の分子基盤の解明

Research Project

Project/Area Number 18K07830
Research InstitutionTokyo Women's Medical University

Principal Investigator

三浦 健一郎  東京女子医科大学, 医学部, 講師 (70408483)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 安彦 行人  国立医薬品食品衛生研究所, 毒性部, 主任研究官 (40370944)
栗原 秀剛  藍野大学, 医療保健学部, 教授 (80311976)
Project Period (FY) 2018-04-01 – 2021-03-31
Keywordsネフローゼ症候群 / ポドサイト / MYH9
Outline of Annual Research Achievements

ポドサイトにおけるMYH9の異常が巣状分節性糸球体硬化あるいは蛋白尿を惹起する機構を解明するために、MYH9-R702Cノックインマウスを用いた実験を行った。まず、NPHS2-CreERT2マウスおよびMyh9-R702Cneoマウスを交配および人工授精・胚移植(IVF-ET)することにより、NPHS2-CreERT2/Myh9-R702Cneoダブルヘテロマウスを得ることに成功し、要時供給可能な体制を整えた。このマウスを用いて、糸球体硬化とポドサイトの形態変化が生じることを確認し、次に各進行段階での免疫染色、免疫電顕を行った。その結果、Myosin IIAは中間径フィラメントではなくアクチンに結合することが判明した。このため、α-actinin 4およびsynaptopodinとの共局在について解析し知見を得た。
一方、CRISPR/Cas9システムを用いて培養ポドサイトにMYH9遺伝子のR702C変異を導入した細胞株を用いて、MYH9と相互作用する蛋白の解析を行うことを目的として、CRISPR/Cas9を用いたゲノム編集を行った。培養ポドサイトにpcDNA3.1を用いてプラスミドでMYH9遺伝子のR702変異およびwild typeの遺伝子を導入し、培養を継代し、細胞数を増加させた。これを用いて、RT-PCR法およびWestern blotting法にて変異の導入を確認している。今後、東京大学医科学研究所プロテオミクスラボラトリーに依頼し相互作用プロテオミクスを施行する基盤となる。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

当該年度はMYH9-R702Cノックインマウスにおける免疫電顕を含めた病理学的変化を観察することを目標としており、それが達成されたため。

Strategy for Future Research Activity

R702変異を導入した培養ポドサイトを用いて、細胞の微細構造の変化を観察する。また、相互作用プロテオミクスを施行し、MYH9と他のポドサイト関連分子・細胞骨格関連分子との結合および相互作用を解析する。この結果をもとに、MYH9-R702時期/組織特異的ノックインマウスにおいてMYH9およびポドサイト関連分子の病理学的変化を観察する。免疫電顕も併用することで、微細構造内における局在変化を解析し、MYH9異常がポドサイトの細胞骨格を障害する機序を明らかにする。

Causes of Carryover

免疫染色と細胞培養のための試薬・機器使用代が予定よりも抑えられたため。次年度の試薬代およびプロテオミクス費用に充当する。

  • Research Products

    (15 results)

All 2019 2018

All Journal Article (6 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (8 results) (of which Int'l Joint Research: 2 results,  Invited: 2 results) Book (1 results)

  • [Journal Article] Exosome-mediated horizontal gene transfer occurs in double-strand break repair during genome editing.2019

    • Author(s)
      Ono R, Yasuhiko Y, Aisaki KI, Kitajima S, Kanno J, Hirabayashi Y
    • Journal Title

      Commun Biol

      Volume: 2 Pages: 57

    • DOI

      10.1038/s42003-019-0300-2.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Manipulation of nephron patterning signals enables selective induction of glomerular podocytes from human pluripotent stem cells.2019

    • Author(s)
      Yoshimura Y, Taguchi A, Tanigawa S,Yatsuda J, Kamba T, Takahashi S, Kurihara H, Mukoyama M, Nishinakamura R
    • Journal Title

      J Am Soc Nephrol

      Volume: 30 Pages: 304-321

    • DOI

      org/10.1681/ASN.2018070747.

  • [Journal Article] 巨大血小板性血小板減少症(Epstein症候群、Fechtner症候群)2018

    • Author(s)
      三浦健一郎、服部元史
    • Journal Title

      腎と透析

      Volume: 84 Pages: 585-589

  • [Journal Article] エプスタイン(Epstein)症候群2018

    • Author(s)
      白井陽子、三浦健一郎、服部元史
    • Journal Title

      小児科診療

      Volume: 81 Pages: 1773-1777

  • [Journal Article] UNC119 is a binding partner of a tumor suppressor RASSF6 and induces apoptosis and cell cycle arrest via MDM2 and p53.2018

    • Author(s)
      Iwasa H, Sarkar A, Shimizu T, Sawada T, Hossain S, Xu X, MaruyamaJ, Arimoto-Matsuzaki K, Withanage K, Nakagawa K, Kurihara H, Kuroyanagi H, Hata Y
    • Journal Title

      Cancer Sci

      Volume: 109 Pages: 2767-2780

    • DOI

      10.1111/cas.13706.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Organoids from nephrotic disease-derived iPSCs identify impaired NEPHRIN localization and slit diaphragm formation in kidney podocytes.2018

    • Author(s)
      Tanigawa S, Islam M, Naganuma H, Yoshimura Y, Miike K, Sharmin S, Haque F, Era T, Nakazato H, Nakanishi K, Sakuma T, Yamamoto T, Kurihara H, Taguchi A, Nishinakamura R
    • Journal Title

      Stem Cell Rep

      Volume: 11 Pages: 1-14

    • DOI

      org/10.1016/j.stemcr.2018.08.003.

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] 小児腎移植と遺伝子検査―FSGSの再発リスク評価2018

    • Author(s)
      三浦健一郎、服部元史
    • Organizer
      第51回日本臨床腎移植学会
    • Invited
  • [Presentation] 巣状分節性糸球体硬化症(FSGS)の腎移植:再発リスク評価と治療2018

    • Author(s)
      三浦健一郎、服部元史
    • Organizer
      第54回日本移植学会総会
    • Invited
  • [Presentation] The size of urinary podocyte in focal segmental glomerulosclerosis2018

    • Author(s)
      Shirai Y, Miura K, Yokoyama T, Horita S, Iida T, Taniguchi Y, Nagasawa T, Ban H, Yabuuchi T, Kaneko N, Takagi Y, Ishizuka K, Hara M, Hattori M
    • Organizer
      American Society of Nephrology Kidney Week 2018
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] 巣状分節性糸球体硬化症における尿中podocyteサイズの検討2018

    • Author(s)
      白井陽子、横山貴、堀田茂、三浦健一郎、谷口洋平、長澤武、久富隆太郎、伴英樹、薮内智朗、金子直人、高木陽子、石塚喜世伸、近本裕子、秋岡祐子、原正則、服部元史
    • Organizer
      第53回日本小児腎臓病学会学術集会
  • [Presentation] A possible risk of genome editing for human gene therapy.2018

    • Author(s)
      Ono R, Tano K, Yasuda S, Yasuhiko Y, Aisaki K, Kitajima S, Kanno J, Sato Y, Hirabayashi Y
    • Organizer
      54th Congress of the European Societies of Toxicology
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Modulation of Shh signaling is involved in intervertebral disc/vertebral body (IVD/VB) patterning and resegmentation of neural arches in mouse vertebral column formation2018

    • Author(s)
      Takahashi Y, Yasuhiko Y, Ikeno E, Kanno J, Hirabayashi Y
    • Organizer
      第70回日本細胞生物学会・第51回日本発生生物学会合同大会
  • [Presentation] Altered expression of acetylated tubulin in enteric neurons in Hirschsprung disease mouse model.2018

    • Author(s)
      宮原克、田中奈々、藤原なほ、栗原秀剛、山高篤行
    • Organizer
      第107回日本病理学会総会
  • [Presentation] 腎糸球体上皮細胞の突起形成におけるRacGAP因子FilGAPの機能解析.2018

    • Author(s)
      斉藤康二、水田さり、多田奏絵、栗原秀剛、太田安隆
    • Organizer
      第91回日本生化学会大会
  • [Book] ジュンケイラ組織学 第5版2018

    • Author(s)
      栗原秀剛
    • Total Pages
      608
    • Publisher
      丸善
    • ISBN
      978-4-621-30339-9

URL: 

Published: 2019-12-27  

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