Basic study of anti-tumor immunity induction by CDK4 / 6 inhibitor for hepatocellular carcinoma

2020 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 18K07944
• Research Institution: Nagasaki University
• Principal Investigator: 中尾 一彦 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 教授 (00264218)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 玉田 陽子 長崎大学, 病院(医学系), 助教 (70393460)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: 肝癌 / CDK4/6阻害薬 / 胞増殖抑制

Outline of Annual Research Achievements

ヒト肝癌細胞株として、RB遺伝子が正常のHuH-7、RB遺伝子が欠失変異しているHep3B、RB遺伝子は正常であるがCDK4/6阻害薬に抵抗性と報告のあるPLC/PRF/5を用いた。これらの培養細胞にCDK4/6阻害薬を添加し、細胞増殖抑制、RB蛋白の脱リン酸化、E2Fの活性低下の有無を確認した。HuH-7細胞において、CDK4/6阻害薬添加によりG1 arrest、RB蛋白の脱リン酸化、E2Fの活性低下が確認された。陰性コントロールであるHep3B細胞では、RB遺伝子が欠失しているにも関わらずCDK4/6阻害添加によりG1 arrestを認めた。しかし、RB蛋白の脱リン酸化、E2Fの活性低下は確認されなかった。PLC/PRF/5細胞では、HuH-7細胞に比してG1 arrestの程度は弱く、RB蛋白の脱リン酸化、E2Fの活性低下も軽度であった。HuH-7細胞において、CDK4/6阻害薬添加によるIFNλの誘導をreal time PCR並びにELISAを用いて定量的に計測した結果、 IFNλの産生が確認された。同じくreal time PCRでHuH7細胞内のIFN誘導遺伝子（ISGs）の発現を確認したところ、PKRmRNAの上昇が認められた。HuH-7細胞にCDK4/6阻害薬を添加し、肝癌細胞表面のMHC class I/β-2MG発現をFlow cytometryで確認したところ、軽度の発現上昇ながら有意な変化を認めた。PDL-1発現変化についてはHuH-7細胞に於いて、CDK4/6阻害薬の添加によりPDL-1発現の上昇が認められた。C57BL/6Jマウス由来肝癌細胞を同系マウス皮下へ移植し腫瘍形成後、CDK4/6阻害薬を投与したところ、有意な腫瘍増殖抑制が認められた。腫瘍周囲のリンパ球浸潤の増加も認められた。