2018 Fiscal Year Research-status Report
潰瘍性大腸炎関連大腸癌におけるサイトメガロウイルス腸管局所再活性化が及ぼす影響
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18K07947
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| Research Institution | Sapporo Medical University |
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Principal Investigator |
川上 賢太郎 札幌医科大学, 医学部, 研究員 (60758712)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
仲瀬 裕志 札幌医科大学, 医学部, 教授 (60362498)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 炎症性発癌 / サイトメガロウィルス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は潰瘍性大腸炎関連発癌機序におけるサイトメガロウィルス（以下CMV）の役割を解明することが研究目標である。そのために、（1）マウスCMV感染マウスを用いた新規炎症性大腸癌モデルを作製し、CMV感染が炎症性大腸癌発症ならびに進展におよぼす関与、（2）ヒト炎症性大腸癌検体を用いて、癌周辺組織におけるCMVの存在と癌の進展との関与について検討すること、この2点を本研究の行動目標としている。
（1）についてはTCR-αノックアウトマウスを繁殖し、腫瘍形成に関する条件の確認を行っている。腫瘍形成群の死亡率は腫瘍非形成群よりも高い傾向にあり、腫瘍性病変におけるIL-4、IL-13、IFN-γ、IL-17、さらに炎症性発癌に重要な役割を果たすTNF-αおよびIL-6の発現をReal time-PCR法を用いて検討している。また、腫瘍形成群、腫瘍非形成群の腸管組織からDNAを抽出し、網羅的にCGHアレイ解析を行い癌抑制遺伝子等の発現を検討している。
（2）については、ヒト手術標本の非炎症粘膜、炎症粘膜、腫瘍性病変（dysplasiaを含む）、ならびにsporadic colon cancerの検体からDNAを抽出し、CMV再活性化の存在を検討している。
（1）についてはTCR-αノックアウトマウスの繁殖不良や死亡、（２）についてはヒト炎症性発大腸癌検体の収集で予定進捗よりやや遅れているが、マウスの新規購入、多施設からヒト炎症性大腸癌検体を集めることで、研究進捗を改善させる方針である。また、申請時に計画した本年度の研究を予定通り実施する。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
TCR-αノックアウトマウスの妊孕性が低下し繁殖が出来なくなったこと、腫瘍形成群での高い死亡率などにより、実験進捗がやや遅れている。これを改善するため、今年度は新たにTCR-αノックアウトマウスを購入し繁殖を推進すること、研究体制の変更で対応する。また、通常の野生型マウス (C57BL/6) にAOM/DSSによる炎症性発癌を起こし、腫瘍形成や浸潤に関する予備的検討を進めている。
ヒト炎症性大腸癌検体が少ない点に関しては、多施設から手術標本を集めることで、研究進捗を改善させる。
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| Strategy for Future Research Activity |
(①MCMV感染マウスモデルを用いた発癌機構の解明
(A)腸管炎症および腫瘍形成について、CMV感染マウスおよCMV非感染マウス間で比較検討する。腸管組織および腫瘍性病変を利用し、炎症性発癌に関与しうる種々のサイトカインをReal time-PCR法を用いて検討する。
(B)マウス腸管から上皮細胞を単離し、種々のサイトカインを添加することにより、CMV感染が上皮細胞増殖におよぼす影響を検討する。樹状細胞やマクロファージを単離しLPS刺激を行い、IL-12、IL-23、IL-18などを測定する。単離されたリンパ球をCD28+CD3抗体によって刺激し、培養上清中の種々のサイトカインを測定する。線維芽細胞を単離し、炎症性サイトカインで刺激を行い、線維芽細胞から産生される活性型TGF-βを測定し、CMV感染が繊維芽細胞に及ぼす影響を検討する。腸管からDNAを抽出し、網羅的CGHアレイ解析を行い癌抑制遺伝子等の発現を検討する。
(C)マイクロアレイ解析による上皮系マーカーと間葉系マーカーの発現を比較検討する。加えて、組織標本において上皮系マーカー及び間葉系マーカーに対する免疫染色を行い腫瘍先進部における上皮系マーカーと間葉系マーカーの発現の強弱を比較する。
②ヒト炎症性大腸癌検体を用いたCMV関連の検討
手術標本の非炎症粘膜、炎症粘膜、腫瘍性病変（dysplasiaを含む）、ならびにsporadic colon cancerの検体からDNAを抽出し、CMV再活性化の存在を評価する。マウスの実験と同様に、腸管組織および腫瘍性病変からRNAを抽出し、TNF-αなどの発現を検討する。
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| Causes of Carryover |
７で記載した通り、TCR-αノックアウトマウスの妊容性が低下し繁殖できなくなったこと、腫瘍死などで使用匹数が増加したこと、ヒト炎症性大腸癌検体が少ないことなどから、研究進捗がやや遅れたことが要因である。本年度は新たにTCR-αノックアウトマウスを購入し、８で記載した実験を遂行するとともに、代替えとして実施している野生型マウス (C57BL/6) に対する炎症性発癌による腫瘍形成や浸潤に関する検討も引き続き実施し、予算執行したい。
ヒト炎症性大腸癌検体を利用した研究は、多施設から検体を集めることで８に記載した実験を遂行するとともに、輸送費などにも使用し、予算を執行したい。
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[Journal Article] The lncidence and risk factors of venous thromboembolism in patients with inflammatory bowel disease : a prospective multicenter cohort study.2019
Author(s)
Ando K, Fujiya M, Nomura Y, Inaba Y, Sugiyama Y, Kobayashi Y, Iwama T, Ijiri M, Takahashi K, Ueno N, Kashima S, Moriichi K, Tanabe H, Mizukami Y, Akasaka K, Fujii S, Yamada S, Nakase H, Okumura T.
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Journal Title
Digestion.
Volume: 14
Pages: 1-9
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Evidence-based clinical practice guidelines for inflammatory bowel disease.2018
Author(s)
Matsuoka K, Kobayashi T, Ueno F, Matsui T, Hirai F, Inoue N, Kato J, Kobayashi K, Kobayashi K, Koganei K, Kunisaki R, Motoya S, Nagahori M, Nakase H, Omata F, Saruta M, Watanabe T, Tanaka T, Kanai T, Noguchi Y, Takahashi K, Watanabe K, Hibi T, Suzuki Y, Watanabe M, Sugano K, Shimosegawa T.
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Journal Title
J Gastroenterol.
Volume: 53
Pages: 305-353
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Clinical and pharmacokinetic factors associated with adalimumab-induced mucosal healing in patients with Crohn’s disease.2018
Author(s)
Watanabe K, Matsumoto T, Hisamatsu T, Nakase H, Motoya S, Yoshimura N, Ishida T, Kato S, Nakagawa T, Esaki M, Nagahori M, Matsui T, Naito Y, Kanai T, Suzuki Y, Nojima M, Watanabe M, Hibi T.
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Journal Title
Clin Gastroenterol Hepatol.
Volume: 16
Pages: 542-549
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Efficacy of endoscopic balloon dilation for small bowel strictures in patients with Crohn’s disease: a nationwide, multi-centre, open-label, prospective cohort study.2018
Author(s)
Hirai F, Andoh A, Ueno F, Watanabe K, Ohmiya N, Nakase H, Kato S, Esaki M, Endo Y, Yamamoto H, Matsui T, Iida M, Hibi T, Watanabe M, Suzuki Y, Matsumoto T.
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Journal Title
J Crohns Colitis.
Volume: 12
Pages: 394-401
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Predicting outcomes to optimize disease management in inflammatory bowel disease in Japan: their differences and similarities to Western countries.2018
Author(s)
Kobayashi T, Hisamatsu T, Suzuki Y, Ogata H, Andoh A, Araki T, Hokari R, Iijima H, Ikeuchi H, Ishiguro Y, Kato S, Kunisai R, Matsumoto T, Motoya S, Nagahori M, Nakamura S, Nakase H, Tsujikawa T, Sasaki M, Yokoyama K, Yoshimura N, Watanabe K, Katafuchi M, Watanabe M, Hibi T.
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Journal Title
Intest Res.
Volume: 16
Pages: 168-177
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Effect of elemental diet combined with infliximab dose escalation in patients with Crohn’s disease with loss of response to infliximab: CERISIER trial.2018
Author(s)
Hisamatsu T, Kunisaki R, Nakamura S, Tsujikawa T, Hirai F, Nakase H, Watanabe K, Yokoyama K, Nagahori M, Kanai T, Naganuma M, Michimae H, Andoh A, Yamada A, Yokoyama T, Kamata N, Tanaka S, Suzuki Y, Hibi T, Watanabe M.
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Journal Title
Intest Res.
Volume: 16
Pages: 494-498
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Usefulness of fecal calprotectin by monoclonal antibody testing in adult Japanese with inflammatory bowel diseases: a prospective multicenter study.2018
Author(s)
Nakamura S, Imaeda H, Nishikawa H, Iimuro M, Matsuura M, Oka H, Oku J, Miyazaki T, Honda H, Watanabe K, Nakase H, Andoh A.
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Journal Title
Intest Res.
Volume: 16
Pages: 554-562
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Efficacy of indigo naturalis in a multicenter randomized controlled trial of patients with ulcerative colitis.2018
Author(s)
Naganuma M, Sugimoto S, Mitsuyama K, Kobayashi T, Yoshimura N, Ohi H, Tanaka S, Andoh A, Ohmiya N, Saigusa K, Yamamoto T, Morohoshi Y, Ichikawa H, Matsuoka K, Hisamatsu T, Watanabe K, Mizuno S, Suda W, Hattori M, Fukuda S, Hirayama A, Abe T, Nakase H, Watanabe M, Hibi T, Suzuki Y, Kanai T.
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Journal Title
Gastroenterology.
Volume: 154
Pages: 935-947
DOI
Peer Reviewed
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