Metabolic switch of macrophages infiltrating injured liver, which regulates fibrosis and fibrolysis.

2018 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 18K07976
• Research Institution: Kagoshima University
• Principal Investigator: 井戸 章雄 鹿児島大学, 医歯学域医学系, 教授 (30291545)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: 肝再生 / 修復 / 急性肝不全 / マクロファージ / gpnmb

Outline of Annual Research Achievements

マウスマクロファージ細胞株RAW264.3細胞にLPSを添加してその性質を検討した。gpmnbを発現していることは確認されたが、M1あるいはM2の形質については明確に区別することができなかった。そこで、マウス骨髄細胞を用いた実験系を確立することとした。すなわち、C57BL・6マウス大腿骨から骨髄細胞を採取し、M-CSFを添加してM0マクロファージを誘導した。このM0マクロファージに、IFN-γおよびLPSを添加してM1マクロファージを誘導した。一方、M-CSFによって誘導したM0マクロファージにIL-4を添加するとM2マクロファージが誘導された。M0、M1およびM2マクロファージにおけるgpnmbおよびc-Metの発現を定量的RT-PCR、ウェスタン法にて確認したところ、gpmnbはM2マクロファージに、c-MetはM1マクロファージに発現増強していることが確認された。これらのマクロファージの分化誘導系を用いて、解糖系および酸化的リン酸化の関連遺伝子の発現、解糖系およびミトコンドリア機能の解析を行なっている。
DBA/2Jマウス（自然発症gpnmb欠損マウス）をC57BL/6マウスにバッククロスしていたが、F10マウスにおいてgpnmb欠損が確認された、C57BL/6バックグラウンドのgpnmb欠損マウスが確認された。C57BL/6野生型およびgpmnb欠損マウスに四塩化炭素を単回投与して急性肝障害を誘導し、肝障害の重症度、組織学的変化、浸潤マクロファージとそのドン職能、線維化関連分子（TGF-β、I型コラーゲン、αSMAなど）の発現を解析している。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

当初、マクロファージの培養細胞株のin vitro実験系を用いることを計画していたが、M1, M2の形質が明確にならないため、新たに骨髄細胞由来のマクロファージを分化誘導する実験系に切り替えた。また、gpnmb欠損マウスのバッククロスに時間を要したが、ようやく今年度中にC57BL/6バックグラウンドのgpnmb欠損マウスで動物実験が実施できるようになった。

Strategy for Future Research Activity

骨髄細胞およびgpnmb欠損マウスを用いた実験をさらに進め、得られた結果から、骨髄移植モデルを用いた実験に発展させる予定である。