Significance of EGR1 as the new response predictors of chemotherapy for gastric cancer

2020 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 18K08006
• Research Institution: The University of Tokushima
• Principal Investigator: 北村 晋志 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(医学域), 助教 (60564490)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 高山 哲治 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(医学域), 教授 (10284994) ; 佐藤 康史 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(医学域), 特任教授 (80343383) ; 六車 直樹 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(医学域), 准教授 (90325283)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: 胃癌 / バイオマーカー

Outline of Annual Research Achievements

ヒト胃癌細胞を用いたDNAマイクロアレイによる解析によって胃癌の抗癌剤耐性に関与する可能性のある遺伝子を同定した。EGR1の他PDGFB, AVPI1, CISH, PCGF3, ANTXR2, PLK2, ANXA5, ATP7B, FAM116A, HECAなどの遺伝子が拾い上げられており、これらの遺伝子について抗癌剤耐性との関連を調べるため、ヒト胃癌細胞株MKN45(HSRRB)を使用し、SiRNAを導入し、ノックダウン細胞を作製したうえで、現在の胃がん治療で頻用される抗癌剤である、docetaxel、CDDP、5FUの それぞれの薬剤について、MTT Assayにより胃癌細胞のviabilityからIC50を求め、negative controlと比較したIC50を測定し、薬剤耐性の変化について検討を行った。本段階の実験では当初有用と考えられたEGR1では大きな変化は認めていなかったが、ANXA5のノックダウンにより5-FUのIC50がに低下した。また、PCGF3のノックダウンにより、DocetaxelのIC50が低下した。そしてCISHのノックダウンにより、5-FUのIC50が低下し、さらにPDGFβのノックダウンにより、5-FUのIC50が上昇していた。siRNAを用いたMTT Assayでは、耐性遺伝子であるANXA5,PCGF3,CISHは遺伝子発現を抑制することで薬剤感受性が上昇し、感受性遺伝子であるPDGFβは遺伝子発現を抑制することで薬剤感受性が低下することが確認された。これらの結果を踏まえ、EGR1単独の検討ではなく、EGR1およびPDGFB, AVPI1, CISH, PCGF3, ANTXR2, PLK2, ANXA5, ATP7B, FAM116A, HECAなどの遺伝子についてもSiRNAを導入実験を行い、薬剤耐性の変化について検討を行った。これらの遺伝子群の中で特定遺伝子について有用性が高い可能性が示唆されたため、消化器癌や他癌腫を含めた臨床検体での発現率を調査した。