2018 Fiscal Year Research-status Report
糸球体内皮・上皮細胞のカベオラを介するアルブミンの細胞透過の抑制による新規治療法
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18K08223
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Research Institution | Tokyo Women's Medical University |
Principal Investigator |
森山 能仁 東京女子医科大学, 医学部, 准教授 (20439821)
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Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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Keywords | カベオラ / エンドサイトーシス / ダイナミン阻害 / セルトラリン / アルブミン / 糸球体内皮細胞 / 糸球体上皮細胞 |
Outline of Annual Research Achievements |
これまで我々はアルブミン尿排泄の新機序として糸球体内皮細胞に発現するカベオラを介し、細胞内を透過する経路を解明してきた。また、近年糸球体上皮細胞に発現するカベオラもアルブミン尿の一因となる可能性が考えられており、このカベオラ経路を阻害することによりアルブミン尿の減少効果が得られる事を証明し、新規治療になり得る可能性を調べた。 カベオラ経路を阻害する薬剤として、カベオラが細胞膜から切り取られ細胞内へ進入する際ダイナミンが関与することに着目し、ダイナミン阻害効果のあるセルトラリンを使用した。in vitroの研究にて糸球体上皮細胞、内皮細胞ともに容量依存のセルトラリンの処理にてカベオラの発現を抑制することなく、アルブミンの細胞内への取り込みが有意にWestern blotting法、免疫染色法で抑制されることが証明された。in vivoの実験においてもピューロマイシン腹腔内投与ネフローゼ症候群モデルマウスを作成し、セルトラリン投与にてpositive controlのDMSO投与マウスと同様に、免疫染色ではカベオリンー1の強発現が認められ、電顕所見も糸球体上皮細胞の足突起の融合、糸球体内皮細胞の腫大が認められたものの、アルブミン尿は正常マウスと同程度に抑制されることが証明された。 これらの結果よりセルトラリンによりカベオラの発現を抑えるのではなく、アルブミンのカベオラを介するエンドサイトーシス自体を抑制し、アルブミン尿の減少効果が得られることが示唆された。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
2018年度はセルトラリンによるカベオラを介するアルブミンのエンドサイトーシスを糸球体上皮細胞、糸球体内皮細胞を用いたin vitroの実験、更にはピューロマイシン腹腔内投与によるネフローゼ症候群モデルマウスを用いたin vivoの実験においても証明することが可能であり、学会発表を行い論文作成も開始しており、概ね順調し進展しているといえる。 更に来年度に向けてストレプトゾトシン腹腔内投与による糖尿病性腎症モデルマウスの作成を始めたのと、更にアルブミンのカベオラを介する細胞内透過、そしてその抑制の証明を確実にするためにアルブミンの免疫金染色による電子顕微鏡下の観察を行うための電子顕微鏡試料作製を行っている。
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Strategy for Future Research Activity |
セルトラリンのアルブミンのエンドサイトーシスの抑制効果、アルブミンの減少効果は免疫機序を介する効果ではないためその他の腎炎に関しても同様の効果が得られる可能性があり、前述の糖尿病性腎症モデルマウス、さらにはアドリアマイシン投与による巣状分節性糸球体硬化症モデルマウスを作成し、効果の確認をする予定である。 また、前述の電子顕微鏡下での免疫金染色アルブミンの観察が順調に進めば、種々のマウスにおいても確実にアルブミンのエンドサイトーシス、セルトラリンによるエンドサイトーシス抑制効果が証明できる。 また、カベオラのエンドサイトーシスに関わるダイナミン以外の分子機構にも着目しその他の薬剤も視野に入れ、検討を重ねる予定である。
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Causes of Carryover |
残高を確認しながら研究費を使用しほとんと予定通りに進行したため概ね予算を使い切ったが、わずかに次年度使用額が余った。 来年度予定通りその他の腎炎のモデルマウスの作成、セルトラリン、その他の薬剤の効果の確認、アルブミン免疫金染色を行い、そのための予算に加える。
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Research Products
(4 results)