2020 Fiscal Year Annual Research Report
Double-strand DNA injury in acute and chronic stages of renal allografts
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18K08256
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| Research Institution | Kanazawa Medical University |
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Principal Investigator |
横山 仁 金沢医科大学, 医学部, 教授 (50191531)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 疾患コホート / DNA損傷マーカー / VI型膠原線維 / 移植腎障害 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
（１）移植腎症の疾患コホート作成と解析：金沢医科大学において2007年以後に腎移植および腎生検が実施された移植腎症(137例)の疾患コホートの後向き調査において，移植腎生検例のBanff分類による移植腎病変，腎線維化のスコア化および免疫蛍光抗体法を用いたリン酸化(γ-) H2AXを指標としたDNA損傷の発現細胞核数による定量的評価を行った．
（２）臨床病理学的診断における病変部血管・線維化の意義：コホート症例における生検組織の画像解析により，病変部位でのDNA損傷の程度を計測した．また，DNA損傷マーカー(γ-H2AX)の尿細管上皮における発現を計測ソフトにより定量化し，移植早期におけるPNFあるいはDGFの診断に適切な指標であることを報告した．
（３）培養ヒト糸球体内皮細胞によるVI型膠原線維(COL6)分泌における細胞内シグナル伝達経路の解析：DNA損傷誘発剤マイトマイシンC (MMC)あるいは過酸化水素処理した実験系により以下を明らかとした．1) DNA損傷によるCOL6分泌の誘導シグナルの同定：DNA損傷時のシグナル伝達で中心的な役割を果たす3つのキナーゼ(ATM，ATR，DNA-PK)を特異的阻害剤(KU55933，VE-821，Nu7441)で抑制し，VE-821処理によるCOL6の分泌低下が判明した．2) 細胞内輸送分子候補として細胞内Annexin A2の細胞膜移行を解析した結果，Annexin A2の移行もVE-821で阻害されることが判明した．また，Annexin A2をノックダウンした細胞においても，COL6の分泌抑制を確認した. 3) ATRおよびANXA2のCOL6分泌に対する相互作用の確認実験において，ANXA2は輸送蛋白として働き，ATRが直接的あるいは間接的にANXA2に作用し，これらはCOL6分泌の同経路である可能性が示唆された.
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