2022 Fiscal Year Research-status Report

CD1aを介した脂質抗原提示と皮膚炎惹起メカニズム

Research Project

Project/Area Number	18K08310
Research Institution	Tokyo Women's Medical University
Principal Investigator	荒尾知子東京女子医科大学, 医学部, 准教授 (80397629)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	久保亜紀子慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 助教 (50455573) 久保亮治慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 准教授 (70335256) [Withdrawn]
Project Period (FY)	2018-04-01 – 2024-03-31
Keywords	CHILD症候群 / NSDHL / コレステロール代謝物 / モデルマウス / 乾癬様皮疹
Outline of Annual Research Achievements	CHILD症候群モデルマウス(K5-Cre-NSDHL+/--CD1a-tg)の作成表皮特異的NSDHLコンディショナルノックアウトマウス(K5-Cre-NSDHLflox)の作成マウスES細胞にNSDHLターゲッティングベクターをエレクトロポレーションにて導入し、コロニーのピックアップを行った。ES細胞のスクリーニング後、胚盤胞 (BALB/c)への注入を行い、NSDHLキメラマウスを作成した。ES細胞(毛が黒色)とホスト胚(BALB/c)(アルピノ)とのキメラF1マウス(♂)と、B6(黒色)マウスと交配し、黒色のF2マウス♀5匹について、ジェノタイピングを行った。キメラマウスの尾からCica GeneusトータルDNAプレップキットを用いてDNAを抽出した。ターゲットベクターを挟むように数カ所primerを設定してPCRを行い、ジェノタイプを確認した。さらにNSDHLキメラマウスとK5-Creを掛け合わせてNSDHL変異を持つK5-Cre-NSDHLfloxを作成し、表皮特異的にNSDHLをノックアウトした。表皮特異的NSDHLコンディショナルノックアウトマウスの皮膚にモザイク状に脱毛を伴うphenotypeが見られ、3匹のマウスについてその部位の皮膚を生検して、皮膚のHE染色を行った。脱毛部では表皮の菲薄化と毛包構造の消失があり、一方で有毛部では、皮膚炎を想起させる角質層の錯角化を認めた。今後、これらの組織についてNSDHLの発現を免疫染色で確認し、Western blotにてNSDHLの発現量の定量を行う。また、ガスクロマトグラフィーにてコレステロール代謝物の定量を行う。また、研究成果を国際学会にて発表し、論文として投稿予定。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 3: Progress in research has been slightly delayed. Reason COVID-19流行により、共同研究施設との往来、カンファレンスなどを含めた連携に支障が生じた。
Strategy for Future Research Activity	CHILD症候群モデルマウスのフェノタイプの解析を引き続き行う。また、研究成果を学会および論文として発表する。
Causes of Carryover	COVID-19流行により計画変更が生じたため。