2021 Fiscal Year Research-status Report
EPCRに結合するモノクローナル抗体による重症性マラリア治療法の開発
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18K08333
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Research Institution | Saga University |
Principal Investigator |
福留 健司 佐賀大学, 全学教育機構, 教授 (50284625)
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Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2023-03-31
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Keywords | 血管内皮 / プロテインC / マラリア / 血栓 |
Outline of Annual Research Achievements |
一般的なマラリア原虫は、感染時においてスカベンジャー受容体であるCD36を利用しているが、致死的な血栓症を呈する重症マラリアは、異なる分子である血管内皮プロテインC受容体(Endothelial Cell Protein C Receptor: EPCR)を受容体として利用している。 EPCRは免疫系のCD1/MHCファミリーに相同性を有する分子であり、その細胞外ドメインはMHC分子のα1、α2ドメインに相当する部位からなる。 MHCと同様に、これらのドメインの接合部分に形成される溝構造にプロテインCのGlaドメインが結合する。 我々は、ヒトとマウスのEPCRの結合部位近傍に結合することでプロテインCの結合を阻止できるモノククローナル抗体を多数樹立した。 これにより、EPCRが有する様々な整理機能が明らかにされた。 この過程において、プロテインCの結合部位以外の部位に結合するモノクローナル抗体も多数作成することができた。 これらの抗体は、EPCRの重要な機能である血液凝固制御機能や血管内皮保護機能を損なわないので、重症マラリヤ感染症の治療薬への応用が期待できた。 そこで、これらの抗体の中でもヒトEPCRに対して格段に強い結合活性を有するラットモノクローナル抗体を選別して、その可変部領域のcDNAをクローニングして塩基配列を決定した。 この情報により、ヒトIgGとのキメラ抗体をコードする発現プラスミドを得た。 これをHEK293細胞にトランスフェクトして、無血清培養することで組み替えタンパク質を安定的に産生するシステムを構築した。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
抗体遺伝子の解析、キメラタンパク発現プラスミドの構築、組み替え蛋白の発現システムの構築までは、予定外の速度で終了できた。 しかし、機能解析に関しては米国ウエイン州立大学で共同研究する予定になっていたので、この点に関してはコロナ禍で思うように進まなかった。
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Strategy for Future Research Activity |
組み替え蛋白の機能を、in vitro, in vivoで明らかにして医薬品への応用を検討する。
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Causes of Carryover |
ノックアウトマウスを保有している米国ウエイン州立大学との共同実験が、コロナの影響で不可能であった。 状況が改善次第、渡米する。
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