2022 Fiscal Year Annual Research Report
Development of humanized anti-EPCR mAb
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18K08333
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| Research Institution | Saga University |
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Principal Investigator |
福留 健司 佐賀大学, 全学教育機構, 教授 (50284625)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | プロテインC / マラリア / モノクローナル抗体 / 血栓症 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
一般的なマラリア原虫がスカベンジャー受容体であるCD36を受容体として感染するが、深部静脈血栓を併発することで致死性の高い重症マラリアはCD36ではなく血管内皮上の血管内皮プロテインC受容体(Endothelial Cell Protein C Receptor: EPCR)に結合する。 EPCRは、血管内での血栓形成を抑止する血液凝固制御因子の一つであるプロテインCの活性化に必要な分子であるので、マラリア原虫の結合によってその機能が阻止されると血栓形成が誘発される。 我々が作成したヒトのEPCRを認識するモノクローナル抗体を投与した場合も同様に血栓症を誘発することが予想できる。 一方、EPCRの機能を妨害しないモノクローナル抗体の結合では、重症マラリア原虫の結合が阻止できる可能性が示唆される。 そこで、作成した約400種のラットモノクローナル抗体のなかで、最も結合力が強いモノクローナル抗体を選別し、可変部をコードする遺伝子配列を決定した。 この情報を元に定常領域をヒトIgGに置換したヒト化モノクローナルを産生する発現プラスミドを構築した。 これをヒト腎由来HEK293細胞にトランスフェクトして、安定的に抗体を産生する細胞株を樹立した。 この細胞株を無血清培地細胞培養に馴化して、培養上清から高純度の組み換え抗体を精製する方法を確立した。 この抗体をマラリア治療に応用することを現在検討している。
また、マウスのEPCRの機能を阻止するモノクローナル抗体も作成できた。 この抗体を用いた共同研究により、マウスのin vivoの実験系において、マラリアによるEPCRの機能阻害が血栓による致死を誘導することを明らかにした(O’Regan b. et al, Haematologica, 2022; 107(8): 1950-1954)。
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