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2018 Fiscal Year Research-status Report

異所発現性血液凝固第7因子の癌の静脈血栓塞栓症、悪性化への役割の解明

Research Project

Project/Area Number 18K08346
Research InstitutionKanagawa Cancer Center Research Institute

Principal Investigator

小井詰 史朗  地方独立行政法人神奈川県立病院機構神奈川県立がんセンター(臨床研究所), その他部局等, その他 (60416063)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 宮城 洋平  地方独立行政法人神奈川県立病院機構神奈川県立がんセンター(臨床研究所), 臨床研究所, 所長 (00254194)
Project Period (FY) 2018-04-01 – 2021-03-31
Keywords癌 / 血栓塞栓症
Outline of Annual Research Achievements

血栓塞栓症(TE)は癌患者の予後不良性と関連する重要な合併症である。癌細胞は異所性に血液凝固第7因子(FVII)を産生可能であるが、そのTEへの重要性は不明である。異所発現性FVIIの癌TE発症への効果を検証するために現在FVII遺伝子の発現を恒常的に抑制した細胞の作製法を検討中である。これまで当研究室において異所性FVII遺伝子発現の抑制のためRNA干渉法を試みたが、十分に発現レベルの低下した細胞の取得に至らなかった。当研究室では同様の方法で他の複数の遺伝子の発現を抑制した細胞の取得には成功している。ゆえに異所FVII遺伝子はその抑制細胞の取得が困難な遺伝子と考えられる。本年度は卵巣がん細胞において異所性に発現しているFVIIの遺伝子の発現を他の手法、すなわちゲノム編集法を用いて遺伝子構造レベルで抑制した細胞の作製に取り組んだ。市販のキットを用いてゲノム編集(CRISPR/Cas9)処理を行い、卵巣がん細胞のFVII遺伝子構造の破壊を試みた。次にこの細胞プールについて数十クローンを単離し、増殖させた。これらの細胞についてウェスタン法によりFVIIの発現抑制を検討した。陰性コントロールゲノム編集細胞と比較したところ、ゲノム編集によりFVII発現は低下しているが完全に発現が抑制された細胞は得られなかった。得られた細胞よりDNAを抽出し塩基配列を解析したところ遺伝子構造改変反応が不十分であることが分かった。現在遺伝子構造改変原理の異なる他のゲノム編集キットを用いて細胞の取得を試みている。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

当初の計画通り研究を遂行したが、予想より実験の難度が高かったと考えられる。計画外の実験方法を試みるなど努力したが年度目標に到達しなかった。

Strategy for Future Research Activity

これまでに得られた部分的にゲノム編集反応が起こった細胞を用いて完全にFVII遺伝子発現をノックアウトした細胞の樹立を目指す。また、例えばFVIIが細胞の増殖に極めて重要で完全ノックアウト細胞の樹立が困難と判断された場合は発現誘導タイプのゲノム編集反応を起こす細胞の樹立を検討している。また場合によっては次年度に遂行予定のゲノム編集細胞の取得に依存しない研究計画を前倒しして遂行することも検討している。

Causes of Carryover

初年度に計画した実験の難度が予想より高く、初年度の研究計画を予定通り完了できなかったために次年度使用額が生じた。次年度使用額を利用し本年度も引き続き初年度の目標達制に努める。

  • Research Products

    (5 results)

All 2019 2018

All Journal Article (1 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Peer Reviewed: 1 results) Presentation (4 results)

  • [Journal Article] Cholesterol Starvation and Hypoxia Activate the FVII Gene via the SREBP1-GILZ Pathway in Ovarian Cancer Cells to Produce Procoagulant Microvesicles2019

    • Author(s)
      Koizume S, Takahashi T, Yoshihara M, Nakamura Y, Ruf W, Takenaka K, Miyagi E, and Miyagi Y.
    • Journal Title

      Thromb. Haemost.

      Volume: 印刷中 Pages: 印刷中

    • DOI

      10.1055/s-0039-1687876.

    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
  • [Presentation] 低酸素、血清除去環境に暴露された卵巣癌細胞におけるCD69発現依存的タンパク質リン酸化の解析2018

    • Author(s)
      小井詰史朗、金山知彦、岡山明子、木村弥生、宮城洋平
    • Organizer
      第27回 日本癌転移学会学術集会・総会
  • [Presentation] Ectopic synthesis of CD69 is important for intra-peritoneal survival of ovarian clear cell carcinoma cells2018

    • Author(s)
      小井詰史朗、中村圭靖、吉原光代、竹中克也、宮城洋平
    • Organizer
      第77回 日本癌学会学術総会
  • [Presentation] Expression of an ATP-grasp superfamily enzyme under hypoxia2018

    • Author(s)
      竹中克也、小森由香子、中村圭靖、小井詰史朗、宮城洋平
    • Organizer
      第77回 日本癌学会学術総会
  • [Presentation] 膵臓癌における血栓塞栓症リスクと血液中の組織因子との関連解析2018

    • Author(s)
      小井詰史朗、小林智、高橋朋子、森本学、上野誠、宮城洋平
    • Organizer
      第1回 日本腫瘍循環器学会学術集会

URL: 

Published: 2019-12-27  

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