2019 Fiscal Year Research-status Report
時計遺伝子Bmal1を標的とした関節リウマチ時間生物学療法の開拓
| Project/Area Number |
18K08408
|
|---|
| Research Institution | Kobe University |
|---|
Principal Investigator |
柱本 照 神戸大学, 保健学研究科, 教授 (80346246)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
|
| Keywords | 関節リウマチ / 時計遺伝子 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
関節リウマチ（RA）の病態に関与するケモカインCCL2は細胞遊走を制御し、時計遺伝子Bmal1と同様に転写因子RORα/REV-ERBαに制御される。昨年までの結果を発展させるため、今年度は、TNFα誘導性CCL2発現におけるRORα/REV-ERBαとヒストンアセチル化酵素CBP/p300の役割について更なる検証を行った。
【方法】初代培養RA滑膜細胞に対して、RORα阻害剤SR1001、REV-ERBα促進剤GSK4112(各20μM)、 CBP/p300阻害剤C646(25μM)を用いて前処理後、TNFα(10ng/ml)刺激を行った。また、RNA干渉を用いてCbp /p300両遺伝子発現を抑制した細胞に対してTNFα刺激を行った。各群のCcl2 mRNA発現量(qPCR)と培養上清CCL2(ELISA) を定量した。さらに、C646前処理群後にTNFα刺激した培養上清を用いてスクラッチアッセイおよびF-actin染色を行った。
【結果】TNFα誘導性CCL2発現は、SR1001/GSK4112両剤の同時処理やC646処理することで、あるいはCBP/p300発現を低下させることで抑制された。さらに、C646前処理群後にTNFα刺激した培養上清は、DMSO前処理群後にTNFα刺激した培養上清と比べて滑膜細胞の遊走が抑制され、アクチン重合も抑制された。
【結論】転写因子RORα/REV-ERBαとヒストンアセチル化酵素CBP/p300を介したTNFα誘導性CCL2の発現は、RA滑膜細胞の遊走を制御することが示された。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
これまでの研究成果から、今年度はケモカインCCL2の細胞遊走にあたえる影響に着目した検討を行った。検証には、従来から用いているヒト初代培養系滑膜細胞に加え、不死化滑膜細胞（吉富製薬より供与）の2種類の滑膜細胞を用いた。結果は双方の細胞において共通しており、このことを、Ccl2 mRNA発現量(qPCR)と培養上清CCL2(ELISA) の定量的な方法と、スクラッチアッセイおよびF-actin染色の定性的な方法で、多角的に検証できた。
|
| Strategy for Future Research Activity |
時計遺伝子を介したRA病態形成に対するケモカインCCL2の影響がin vitro実験系において十分に検証できた。特にRA滑膜炎やパンヌス形成におけるCCL2の抑制性の作用が期待できることを踏まえ、次年度はモデル関節炎を用いたwhole bodyでの検証を進めることで、RA新規治療薬の提唱を目指した検証を行う。
|
-
[Journal Article] Expressions of circadian clock genes represent disease activities of RA patients treated with biological DMARDs.2020
Author(s)
Kaneshiro K, Yoshida K, Morii K, Oketani Y, Uchida K, Yaekura A, Okumura I, Hashimoto T, Kawasaki Y, Shibanuma N, Sakai Y, Hashiramoto A.
-
Journal Title
Mod Rheumatol.
Volume: 30
Pages: 293-300
DOI
Peer Reviewed / Open Access
-
-
-
[Presentation] “Roles Of Histone Acetyltransferases CBP/p300 And Transcriptional Factor RORα/REV-ERBα Against TNFα-induced CCL2 Expression in RA-FLSs.”2019
Author(s)
Ikumi Okumura, Kohsuke Yoshida, Kenta Kaneshiro, Koto Uchida, Arisa Yaekura, Yuto Oketani, Kanta Morii, Koji Tateishi, Yasuhiro Terashima, Yoshiko Kawasaki, Nao Shibanuma, Yoshitada Sakai, Akira Hashiramoto.
Organizer
米国リウマチ学会2019
Int'l Joint Research
-
-
-
-
-
-
-
