光線力学療法を応用した非侵襲的センチネルリンパ節転移診断および治療法の開発

2018 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 18K08599
• Research Institution: Keio University
• Principal Investigator: 大西 達也 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 共同研究員 (70445211)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 松田 祐子 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 特任講師 (90534537) ; 日下部 守昭 東京大学, 大学院農学生命科学研究科(農学部), 特任教授 (60153277)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: 光線力学療法 / センチネルリンパ節 / 転移診断

Outline of Annual Research Achievements

免疫不全マウス・ラットを用いてリンパ節転移モデルの作製を行った。GFPを恒常発現させたA431細胞株（類上皮癌細胞株）を用いて、マウス・ラットの上肢に細胞を接種した。転移率を向上させるための検討を接種する細胞の濃度を変化させるなどして行った。
イメージングは、ベルテポルフィンをPMBポリマーで可溶化した製剤を用い、マウス皮下に接種しVilber-Lourmat 社のマルチアプリケーションイメージングシステム、FUSION SYSTEMを用いて行った。リンパ流及びベルテポルフィンの集積部を生体イメージングで確認可能であった。
今後はベルテポルフィンに、抗テネイシン抗体および抗EGFR抗体を、直説法、PMBNポリマー法により標識する。さらにEPR効果確認のために、ポリ乳酸を核とした粒径の違うPMBNプローブや、作製した各プローブをリンパ節転移モデル動物の皮下に投与し、経時的にリンパ節を採取することで、各プローブの停留性やEPR効果、抗体標識によるデリバリー効果を検証する。ベルテポルフィンは凍結乾燥組織からベルテポルフィンをN,Nジメチルホルムアミドにて抽出し、430nmで励起し690～700nmの蛍光強度を測定することで行う。その後、マウスの皮下モデル・リンパ節転移モデル皮下にマルチモーダルプローブを投与して、腫瘍部位とリンパ節にレーザー照射し、PDT効果を判定する。レーザー照射後腫瘍径等を測定することなどして治療効果を判定する。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

転移率の向上のための検討に注力したため、複数種類のマルチモーダルプローブの作製が遅れている。

Strategy for Future Research Activity

今後は実験補助員等の助力も得てマルチモーダルプローブの作製とリンパ節への取り込み実験を行っていく。ベルテポルフィンに、抗テネイシン抗体および抗EGFR抗体を、直説法、PMBNポリマー法により標識する。さらにEPR効果確認のために、ポリ乳酸を核とした粒径の違うPMBNプローブや、作製した各プローブをリンパ節転移モデル動物の皮下に投与し、経時的にリンパ節を採取することで、各プローブの停留性やEPR効果、抗体標識によるデリバリー効果を検証する。ベルテポルフィンは凍結乾燥組織からベルテポルフィンをN,Nジメチルホルムアミドにて抽出し、430nmで励起し690～700nmの蛍光強度を測定することで行う。その後、マウスの皮下モデル・リンパ節転移モデル皮下にマルチモーダルプローブを投与して、腫瘍部位とリンパ節にレーザー照射し、PDT効果を判定する。レーザー照射後腫瘍径等を測定することなどして治療効果を判定する。

Causes of Carryover

若干の遅れが生じたことに伴い、次年度使用額が生じた。次年度では研究補助員等で実験参加人数を増加させるため、人件費として使用する予定である。