2018 Fiscal Year Research-status Report
食道癌における容積感受性チャネル蛋白LRRC8Aの機能解析と低浸透圧療法への応用
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18K08628
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| Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
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Principal Investigator |
原田 恭一 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (80804822)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大辻 英吾 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (20244600)
塩崎 敦 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (40568086)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 食道外科学 / イオンチャネル / 低浸透圧 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
平成30年度は、まず、ヒト食道癌組織における容積感受性チャネル蛋白LRRC8Aの発現レベルを解析した。扁平上皮癌組織において、癌細胞の細胞膜・細胞質にLRRC8A発現が確認された。LRRC8A高発現群、低発現群で比較すると発現強度は深達度 (pT)、リンパ節転移 (pN)と関連した。生存解析ではLRRC8A高発現群では低発現群に比べ有意に予後不良であり、多変量解析では高発現は独立した予後不良因子であった。次に、種々のヒト食道癌細胞株におけるLRRC8A発現を解析し、TE15、KYSE170においてLRRC8Aが高発現していることを確認した。TE15、KYSE170に対してLRRC8A siRNAをトランスフェクションしたところ、細胞増殖能、遊走・浸潤能が低下しアポトーシスが惹起された。Microarray解析では食道扁平上皮癌細胞株に対するLRRC8Aのノックダウンにより、G1/S checkpoint regulationに関与するp21やp27、E2F7や細胞接着に関与するMMPやIntegrinなどを含む多くの遺伝子発現を促進/抑制していた。
更に、食道扁平上皮癌細胞株にLRRC8A siRNAをトランスフェクションし、低浸透圧刺激に対する反応性の解析を行った。LRRC8Aのノックダウンにより、調節性容積減少(RVD)が抑制され、低浸透圧による殺細胞効果が増強されることが確認された。現在、食道扁平上皮癌細胞株の温度刺激による、LRRC8A 発現変化・低浸透圧刺激に対する反応性の解析を検証している。
一方で、食道癌・胃癌におけるSodium iodide symporter (Gastric Cancer. 2019)、Anion exchanger 2 (Oncotarget. 2018)、Chloride intracellular channel 1 (Oncotarget. 2018)、Aquaporin 1 (Oncotarget. 2018)などのイオン輸送体・pH制御因子・水輸送体の機能解析・臨床病理学的意義を解明した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の研究計画のうち、ヒト食道癌組織における容積感受性チャネル蛋白LRRC8Aの発現解析、癌細胞におけるLRRC8Aを介する細胞周期・アポトーシス・細胞浸潤制御機構の解明、食道扁平上皮癌細胞株のLRRC8A 発現調節（siRNA）と低浸透圧刺激に対する反応性の解析などの基礎実験は、ほぼ終了している。また、上部消化管癌における種々のイオン輸送体・pH制御因子の機能解析も進展しており、研究成果は既に国内外の学会で発表し、英文雑誌にも投稿・掲載されている。現在、食道扁平上皮癌細胞株の温度刺激による、LRRC8A 発現変化・低浸透圧刺激に対する反応性の解析も進行しており、研究目的・研究計画はおおむね順調に進展していると考える。
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| Strategy for Future Research Activity |
次年度以降は、ヒト食道扁平上皮癌細胞株におけるLRRC8A発現ベクターを用いた際の低浸透圧刺激に対する反応性（RVDや、低浸透圧殺細胞効果への影響）の解析を行う。また、温度刺激（低温・高温）によるLRRC8A 発現変化・細胞内局在変化・低浸透圧刺激に対する反応性への影響を検証する。更に、マウス胸膜転移モデルを用い、in vivoにおけるLRRC8A 発現レベルによる低浸透圧細胞破壊療法反応性、温度が及ばす影響について検討する予定である。
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[Journal Article] Anion exchanger 2 suppresses cellular movement and has prognostic significance in esophageal squamous cell carcinoma2018
Author(s)
Shiozaki A, Hikami S, Ichikawa D, Kosuga T, Shimizu H, Kudou M, Yamazato Y, Kobayashi T, Shoda K, Arita T, Konishi H, Komatsu S, Kubota T, Fujiwara H, Okamoto K, Kishimoto M, Konishi E, Marunaka Y, Otsuji E
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Journal Title
Oncotarget
Volume: 9
Pages: 25993～26006
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Presentation] 食道癌幹細胞特異的に発現するion channelの同定と新規標的治療への応用2018
Author(s)
塩﨑敦, 工藤道弘, 藤原斉, 小西博貴, 庄田勝俊, 有田智洋, 小菅敏幸, 森村玲, 村山康利, 栗生宜明, 生駒久視, 窪田健, 中西正芳, 岡本和真, 大辻英吾
Organizer
JDDW2018（第16回日本消化器外科学会大会）
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[Presentation] Functional analysis and prognostic value of sodium iodide symporter (NIS) in gastric cancer2018
Author(s)
Atsushi Shiozaki, Yosuke Ariyoshi, Toshiyuki Kosuga, Michihiro Kudou, Katsutoshi Shoda, Tomohiro Arita, Hirotaka Konishi, Shuhei Komatsu, Takeshi Kubota, Hitoshi Fujiwara, Kazuma Okamoto, Yoshinori Marunaka, Eigo Otsuji
Organizer
第77回日本癌学会学術総会
