2019 Fiscal Year Research-status Report
Study of insulin signal activation by TIGAR in colorectal cancer microenvironment
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18K08634
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| Research Institution | Kawasaki Medical School |
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Principal Investigator |
鶴田 淳 川崎医科大学, 医学部, 准教授 (00721961)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
永坂 岳司 川崎医科大学, 医学部, 准教授 (30452569)
眞部 紀明 川崎医科大学, 医学部, 教授 (50403572)
上野 富雄 川崎医科大学, 医学部, 教授 (70284255)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | TIGAR遺伝子 / 大腸がん |
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| Outline of Annual Research Achievements |
①「大腸癌臨床検体におけるTIGAR遺伝子のCopy Number Variant (CNV)、メチル化解析による分類と臨床病理学的因子・予後の検討」: ヒト大腸癌臨床検体274例についてTIGARメチル化アッセイを行った。40症例（14.6%）に5%以上のメチル化を認めた。これをTIGAR Met ケースとし、それ以外のTIGAR Unmet ケースと比較検討した。背景因子として両群間に性別、UICCステージ、組織型、局在、KRAS/BRAF変異について有意な差を認めなかった。StageⅠ－Ⅲの根治切除例のRelapse-free- survival（RFS）については両群間に差を認めなかった。②「進行大腸癌根治手術症例のTIGAR発現と生存期間の解析」：StageⅡ/Ⅲ大腸癌根治手術200例の病理学的検体を用い免疫染色にてTIGAR発現を解析し、長期予後との関連性を検証する。免疫染色を100検体終了し、解析中である。③「TIGARによる細胞増殖に関するin vitro実験」：ヒト結腸がん細胞増殖におけるTIGARの効果をTIGAR siRNAによりノックダウンした場合としない場合において比較検討した。CaCO2、HCT116においてはTIGAR siRNA群の方が有意に増殖抑制されていた（p=0.014, <0.0001）。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
①大腸癌臨床検体におけるTIGAR遺伝子のCopy Number Variant (CNV)、メチル化解析による分類と臨床病理学的因子・予後の検討：2019年度は大腸癌組織1000余例のうち、274例についてTIGARメチル化アッセイを行った。今後は残りの700余例のメチル化解析を順次行う予定である。
②進行大腸癌根治手術症例のTIGAR発現と生存期間の解析：StageⅡ/Ⅲ大腸癌根治手術200例の病理学的検体を用い免疫染色にてTIGAR発現を解析し、長期予後との関連性を検証する中で、現在のところ半数の100検体が終了し、解析中である。
③TIGAR遺伝子を抑制するマイクロRNA (miRNA) 群を用いたヒトCell lineとマウスモデルでのTIGAR 遺伝子ノックダウンによる腫瘍増殖抑制効果の検討：TIGAR siRNA解析のための適切なCell lineを抽出した。miRNAを用いての腫瘍増殖抑制効果の検討を行なってゆく予定である。そのうちCaCO2、HCT116においてはTIGAR siRNA群の方が有意に増殖抑制されていた（p=0.014, <0.0001）。今後はマイクロRNAによる腫瘍増殖抑制効果の検討を行う予定である。上記①－③の状況を鑑みると必ずしも全てが当初予定のロードマップ通りには進んではいないと評価する。
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| Strategy for Future Research Activity |
①大腸癌臨床検体におけるTIGAR遺伝子のCopy Number Variant (CNV)、メチル化解析による分類と臨床病理学的因子・予後の検討：これまでに解析されたヒト大腸癌臨床検体274例についてのTIGARメチル化アッセイについて報告した。今後は残る約800例の献体について検証を継続する予定である。
②進行大腸癌根治手術症例のTIGAR発現と生存期間の解析：条件設定が終了し、現在のところ100検体まで免疫染色が終了している。今後は残り100検体の免疫染色を行い、病理組織学的特徴を検証する予定である。
③TIGARによる細胞増殖に関するin vitro実験、TIGAR遺伝子を抑制するマイクロRNA (miRNA) 群を用いたヒトCell lineとマウスモデルでのTIGAR 遺伝子ノックダウンによる腫瘍増殖抑制効果の検討：ヒト結腸がんcell lineにおけるTIGAR発現の効果をsiRNAによる解析が終了したため、今後はヒトTIGARをターゲットにmiRNAによるTIGARのノックダウン効果の検討を行う予定である。
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| Causes of Carryover |
次年度に繰り越しますが、問題ありません。予定していたマイクロRNA実験の遅れにより次年度使用額が生じた。次年度に繰り越しマイクロRNA実験に使用予定である。
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