2019 Fiscal Year Research-status Report
膵・胆道癌早期診断を目指した十二指腸液exosome中バイオマーカーの開発
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18K08648
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
高畑 俊一 九州大学, 医学研究院, 共同研究員 (50437779)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大塚 隆生 九州大学, 医学研究院, 准教授 (20372766)
森 泰寿 九州大学, 大学病院, 助教 (50632642)
貞苅 良彦 九州大学, 医学研究院, 共同研究員 (80784503)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 胆道癌 / セネセンス / マイクロRNA |
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| Outline of Annual Research Achievements |
膵液中、及び十二指腸液中にはexosomeの存在すら報告されておらず、未知の領域であり、特に膵液は非常に強力な消化液として知られており、今まで分子マーカー検索に不向きと言われてきた。既に多くの十二指腸液、膵液、胆汁サンプルを当研究室では保管している。同サンプルから各々exosomeの抽出を試み存在を証明し、その安定性を検討することを目標とした。最終的には十二指腸液サンプルでのexosome抽出、内包される蛋白質、RNA、DNAの抽出を目標とした。
既に当研究室で採取、保存してきた多数の胆汁、膵液、十二指腸液中exosome 由来RNA・蛋白質の発現解析、DNA の変異解析を行いスクリーニングに耐え得る分子マーカーを同定している。さらにプロスペクティブに十二指腸液を採取し、膵、胆道癌高危険群同定、及び早期癌の診断精度を検証する。既に当研究室では胆汁中、膵液中のexosome 抽出に成功しており、exosome の安定性についての検証も終えている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
これまで胆汁中のmicroRNA抽出、および胆道癌発癌高危険因子である膵胆管合流異常に注目して、術前のERC下に採取した胆汁からRNAを抽出し、microRNAの定量を行った。以前我々は膵液を用いてmicroRNA解析を行ってきたが、胆汁では同様の手技ではRNAの抽出は困難であった。そこで胆汁中のエクソソーム解析を行うこととした。エクソソームの証明としては①電子顕微鏡で小胞の確認、②ナノ粒子トラッキング解析(Nanosight)、③エクソソームマーカー解析（CD63, etc）が必要であり、胆汁を用いた解析で安定して①②③を再現性を以って示すことができた。また当研究室では胆汁・膵液中exosomeの抽出に成功し報告した。
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| Strategy for Future Research Activity |
同定された新規分子マーカーを2 重盲検でサンプル解析を行う。集積されたサンプルからexosome を抽出し、これまでの結果に基づき、早期癌の診断精度を検討する。また膵・胆道癌発癌高危険因子を抽出し、早期診断に向けた新規バイオマーカの開発に向けて準備を進めていく。
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| Causes of Carryover |
研究はおおむね順調に進展しており、計画的に使用している。今後は、人件費、研究に必要な抗体や機材・物品の購入に使用する予定である。
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