Functional analysis of the intercellular adhesion molecule Claudin in gastrointestinal cancer lymph node metastasis

2020 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 18K08676
• Research Institution: Shiga University of Medical Science
• Principal Investigator: 三宅 亨 滋賀医科大学, 医学部, 講師 (70581924)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 谷 眞至 滋賀医科大学, 医学部, 教授 (60236677) ; 生田 大二 滋賀医科大学, 医学部, 客員助教 (00581935) ; 徳田 彩 滋賀医科大学, 医学部, 医員 (80814392)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: Claudin / 大腸癌

Outline of Annual Research Achievements

Claudinは接着因子であり、細胞間結合に重要な役割を果たす。本研究では癌リンパ節転移におけるClaudinの機能解析をおこなった。 マウス大腸癌細胞株 であるCT26を用いて、Claudin9の強制発現株を作成した。Claudin9の発現が上昇していることをqPCRで確認し、強制発現株ではCT26の親株と比較して約5000倍の mRNAの発現の上昇があることを確認した。また、western blottingを用いて、CT26でのClaudin9強制発現株においてClaudin9蛋白が高発現であることを確認し た。次に、Claudin9の強制発現細胞株と親株であるCT26を用いて細胞増殖についてCCK-8を用いて検討した。CT26とClaudin9の強制発現細胞株では細胞増殖に有意な差を認めなかった。これより、in vitroにおいてはClaudin9はCT26の細胞増殖には影響しないと考えられた。 確立した遺伝子改変細胞株をマウスへ静脈注射にて移植を行い、肺転移腫瘍の面積で検討すると肺転移がClaudin9高発現細胞株で増加していた。また、肺の重量 も増加しており、肺転移の増加と矛盾しない結果であると考えられた。また、肺組織 からRNAを抽出し、マイクロアレイにて発現を検討した結果、IFNの低下を認め、免疫が抑制されている可能性が示唆された。 また、臨床検体を用いて大腸癌の原発巣におけるClaudin9の発現について検討を行った。薄切スライドを作成し、免疫染色を行い、生存率で差を認めた。