臨床応用を目的とした膵癌におけるオメガ3不飽和脂肪酸の抗血管新生効果の検討

2019 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 18K08713
• Research Institution: Nagoya City University
• Principal Investigator: 林 祐一 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 助教 (60811726)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 松尾 洋一 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 准教授 (40381800) ; 高橋 広城 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 准教授 (30381792) ; 坪井 謙 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 助教 (80592500)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: レゾルビン / オメガ3不飽和脂肪酸 / 血管新生 / NF-κB / 膵癌

Outline of Annual Research Achievements

2018年度は，オメガ3不飽和脂肪酸のEPAやDHAの代謝産物であるレゾルビンを用いてin vitroの実験を行った．Cell Proliferation assayとしてWST-1法を行い，レゾルビンの膵癌細胞株に対する増殖能への影響を検討した．結果は，いずれの細胞株においても増殖抑制効果を認めなかった．次に，レゾルビンで処理した膵癌細胞株の培養上清中でELISAを行い，血管新生因子VEGFの産生量を評価した．コントロールと比べ，レゾルビン処理群でVEGF産生量の低下を認めた．レゾルビン100nMよりも1μMのほうがよりVEGFの産生量が低下しており，レゾルビンは濃度依存性に膵癌細胞株のVEGF産生を抑制する可能性が考えられた．しかし，その後の解析で，レゾルビンの溶媒であるDMSOの濃度により結果が大きく変動することが判明した．
2019年度は，DMSO濃度により膵癌細胞株のVEGF産生が変化する原因は特定できず，レゾルビンの溶解に使用したDMSO濃度を一定にすることで，実験を再度繰り返し行うこととした．その結果，レゾルビンの濃度変化によるVEGF産生量の変化は認められなかったが，qRT-PCRの結果では，VEGF mRNAの転写レベルにおいては，レゾルビン処理群のほうがVEGF発現低下をきたすことが示唆された．しかし，繰り返し検証を行ったが，結果が安定せず，その原因の特定には至っていない．

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

レゾルビンは膵癌細胞株の血管新生因子VEGFの産生を低下しうる結果は得られているが，その検証は安定せず，繰り返し条件を変えながら実施する必要があり，研究そのものの進捗は滞っている状態である．

Strategy for Future Research Activity

レゾルビンのVEGF産生を抑制するメカニズムとして転写因子NF-κBが関与していることが予想されるため，レゾルビン処理によるNF-κBの活性変化を蛍光免疫染色，核内タンパクのNF-κB ELISAで検証していく．

Causes of Carryover

前年度に引き続き，繰り返す検証実験が重なったため，実質の経費としては少ない．今後は，レゾルビンによるNF-κBの活性変化を検証していくため，核内タンパク抽出キットやELISAキットの購入も必要である．また，レゾルビンの消費も多く，単価が比較的高いレゾルビンの追加購入も必要であるため，前年度の残額を用いてその購入費用に充当する予定である．