2018 Fiscal Year Research-status Report
CBB法を用いたイオンチャネルに対する麻酔薬の作用機序の解明
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18K08850
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| Research Institution | University of Fukui |
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Principal Investigator |
松木 悠佳 福井大学, 学術研究院医学系部門, 助教 (10464083)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | イオンチャネル |
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| Outline of Annual Research Achievements |
液滴接触二重膜法（Contact Babble Bilayer法；CBB法）を用いて、KcsAカリウムチャネル機能計測方法を確立することを試みた。スライドグラスに油相としてヘキサデカン(100ul)を満たす。油相にはあらかじめリン脂質（アゾレクチン）を分散させた。ガラス電極（ピペット）に電解質溶液を満たし、先端を油相に入れ、圧力をかけてバブルを吹き出す。KcsAカリウムチャネルは酸性のpHで開口する性質を利用して、片側のバブルはｐH7.5（200mM KCL,10mM Hepes,pH7.5）に調節し、反対側のバブルはpH4.0（200mM KCL,10mM こはく酸,pH4.0）に調節した。こうすることでチャネルの向きをそろえることができる。KcsAの濃度は、チャネルが約10個程度入るくらいの濃度で行った。２つのバブルを接触させて脂質二重層を形成することに成功できた。KcsAカリウムチャネルの変異体であるE71Aを用いてチャネルの電流計測を試みている。開確率はほぼ100%であった。その状態に、さらに細いピペットを作成し、バブルの中央（脂質二重膜部分）に置き、ヘキサデカン（コントロール）が入ったピペットで吹きかけを試みた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本年度の目標である、「1.イオンチャネル機能計測方法の確立と麻酔薬の濃度依存性効果の評価」のうち、「イオンチャネル機能計測方法の確立」はほぼ終了しているため。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は、「麻酔薬の濃度依存性効果の評価」について取り組みたい。脂質二重膜に投与するための麻酔薬の調整を行う。濃度調節した麻酔薬をあらかじめヘキサデカンに溶解する。CBB法でチャネルが入った脂質二重膜に向けて、油相から細いピペットを用いて麻酔薬を吹きかける。麻酔薬は脂溶性であるため、容易に油相から脂質二重膜へと分配する。本研究では、麻酔薬を濃度依存性に順番に吹きかけていき、その時のチャネル機能を計測する予定である。
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| Causes of Carryover |
消耗品の使用額が少なかった。次年度に繰り越して、消耗品と人件費として使用する予定である。
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