2019 Fiscal Year Research-status Report
Netrin-1 as a novel therapeutic target of medulloblastoma
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18K08984
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| Research Institution | Hiroshima International University |
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Principal Investigator |
中山 寛尚 広島国際大学, 保健医療学部, 講師 (40512132)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 軸索誘導因子 / ネトリン / 転移 / 髄芽腫 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
小児脳腫瘍である髄芽腫（medulloblastoma）は、小脳に発症する悪性腫瘍である。これまでに、髄芽腫細胞が分泌する『軸索誘導因子netrin-1』が髄芽腫細胞の浸潤性や血管新生を誘導することを見出した。そこで、netrin-1が髄芽腫癌幹細胞とその周辺環境組織に影響を与える『癌微小環境制御因子』ではないかと考えた。本研究では、髄芽腫癌幹細胞におけるnetrin-1とそのレセプターの役割を解明し、髄芽腫幹細胞のnetrin-1シグナルを標的とする阻害剤の探索・開発を行い、新たな髄芽腫治療薬の開発を目指す。
本年度においては、上皮間葉転換EMTの発現に関する検討を中心に行った。髄芽腫細胞にnetrin-1を過剰発現する細胞（D425, D458, D556細胞の3種類）では、親株細胞と比較して間葉系マーカーである転写因子2種の発現が上昇していた（ウエスタンブロットと定量PCRにて確認した）。さらに髄芽腫モデルマウス（smo/smo）から摘出した小脳サンプルにおいても間葉系マーカーが上昇しており、netrin-1によるEMTの関与が示唆される結果となった（ウエスタンブロットと免疫染色にて確認した）。
一方で、netrin-1とそのレセプターへの結合を阻害する阻害剤探索のための評価系作成を進めている。Netrin-1リガンドは全長ペプチドに加えて、ドメインごとに分割したペプチドを作成している。これまでにnetrin-1リガンドとレセプターの代表として全長UNC5Cペプチドの作成を完了している。今後は結合実験として、アルファスクリーニングを行う予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
2019年度は、髄芽腫細胞においてnetrin-1がEMT誘導に関与していることを細胞、動物実験にて明らかにすることができた。またnetrin-1阻害剤のスクリーニングの準備が進んでおり、次年度では阻害剤の同定をめざす。
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| Strategy for Future Research Activity |
2020年度においては、netrin-1をCRISPR-Cas9技術によるノックアウトを行い、EMTとの関連を精査する。とくにTGFbシグナルとの関係を明らかにするため、TGFbリガンドで髄芽腫細胞を刺激してnetrin-1リガンドとレセプター発現に影響をもたらすのか検討する。さらにnetrin-1阻害剤の開発のためアルファスクリーニングアッセイを進めていきたい。これらの成果をもとに、動物実験にて効果があるかどうか評価を行う予定である。
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| Causes of Carryover |
予定の実験を次年度に繰り越したため
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