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2020 Fiscal Year Annual Research Report

Establidhment of highly-sensitive TERT mutation assay in glioma

Research Project

Project/Area Number 18K09003
Research InstitutionSaitama Medical University

Principal Investigator

安達 淳一  埼玉医科大学, 医学部, 准教授 (70291143)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 西川 亮  埼玉医科大学, 医学部, 教授 (90237678)
Project Period (FY) 2018-04-01 – 2021-03-31
Keywordsglioma / TERT / droplet digital PCR
Outline of Annual Research Achievements

染色体のテロメア伸長をもたらす逆転写酵素遺伝子であるTERT(Teromerase reverse transcriptase)遺伝子のプロモーター領域の点突然変異(C228TかC250T)が成人膠芽腫の55~83%、乏突起膠腫の70%以上の頻度で検出され,診断上重要な分子マーカーである。TERTプロモーター領域はGC含量が高いうえに繰り返し配列を含むため、変異検出のための通常のDNAシークエンス法では感度や再現性が低く偽陰性が多い。そこで、我々は短時間かつ高感度に再現良くTERT遺伝子変異を解析すべく独自に最適化した Droplet Digital PCR(ddPCR)法の確立を試みた。グリオーマの凍結組織及びパラフィン包埋後の組織由来のDNA 10ngに対して、それぞれ別々の蛍光色素でラベルした TERT変異型と野生型プローブの存在下で最適化したddPCR増幅を行い、変異型と野生型のDNAのコピー数を定量した。その結果、凍結組織及びパラフィン包埋固定後の組織由来DNAに対して、TERT変異型(C228T,C250T)とTERT野生型のアレルのコピー数が競合することなく、1回のddPCRにて定量的に検出された。ddPCR法はサンプル内にPCR増幅される遺伝子があれば必ず増幅検出されるため、0.1%の変異DNAでも検出が可能な高感度な遺伝子変異検出法であり再現性も極めて高い。特に変異のホットスポットが判明している遺伝子解析に対しては有用な方法である。極めて微量のDNAでも解析可能で、血漿や髄液を用いたcirculating DNA からの遺伝子変異検索の可能性へも繋がる画期的な手法である。本法の確立により上記課題の目的は達成された。

  • Research Products

    (3 results)

All 2021 2020

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (2 results)

  • [Journal Article] Droplet digital PCR assay for detection of TERT promoter mutations in glioma patients2021

    • Author(s)
      Adachi J, Shirahata M, Suzuki T, Mishima K, Uchida E, Sasaki A, Nishikawa R
    • Journal Title

      Brain Tumor Pathology

      Volume: - Pages: -

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] グリオーマにおける高感度TERT遺伝子変異検出法の確立2020

    • Author(s)
      安達淳一、白畑充章、鈴木智成、三島一彦、藤巻高光、西川 亮
    • Organizer
      日本脳神経外科学会 第79回学術総会
  • [Presentation] グリオーマにおける Droplet Digital PCR 法を用いた高感度TERT遺伝子変異解析2020

    • Author(s)
      安達淳一、白畑充章、鈴木智成、三島一彦、藤巻高光、西川 亮
    • Organizer
      第38回 日本脳腫瘍学会 学術総会

URL: 

Published: 2021-12-27  

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