外尿道括約筋幹細胞における抑制系シグナル伝達経路の制御による尿失禁治療法の開発

2018 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 18K09171
• Research Institution: Oita University
• Principal Investigator: 三股 浩光 大分大学, 医学部, 教授 (60219714)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 佐藤 吉泰 大分大学, 医学部, 医員 (00796302) ; 秦 聡孝 大分大学, 医学部, 准教授 (60404381) ; 山中 直行 大分大学, 医学部, 医員 (60796415) ; 安藤 忠助 大分大学, 医学部, 講師 (20433047) ; 平井 健一 大分大学, 医学部, 助教 (10404386)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: 外尿道括約筋 / JAK-STAT

Outline of Annual Research Achievements

（方法）予め同意を得た膀胱全摘患者から手術時に外尿道括約筋組織を採取し、組織を細断した後、collagenaseおよびaccutase処理を行い初代培養を行う。筋前駆細胞の単離後、４日以上培養した細胞の一部のRNAを抽出し、残りの細胞は分化誘導培地にて３日間培養した後、RNAを抽出する。マイクロアレイを用いて、増殖・分化に伴う遺伝子発現を網羅的に解析する。
（結果）分化誘導前の細胞では筋前駆細胞の遺伝子マーカーであるPax7,Myf5の発現を認め、分化誘導後の細胞ではMyoG,MHCの発現を認めた。JAK-STAT経路は分化後に軽度発現亢進しており、SOCS3は軽度発現の低下を認めた。
（まとめ）外尿道括約筋細胞の増殖・分化にJAK-STAT経路が関与していることが示唆された。今後、siRNAを用いた遺伝子ノックダウンあるいはウイルスベクターによる過剰発現系を用いて、これらの遺伝子解析を行う。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

外尿道括約筋細胞の増殖・分化にJAK-STAT経路が関与していることが示唆された。

Strategy for Future Research Activity

時系列的に増殖・分化期においてのJAK-STAT経路・SOCS familyの遺伝子発現をRT-qPCRにて評価し、Western-Blottingにて蛋白発現を検討する。
siRNAを用いた遺伝子ノックダウンあるいはウイルスベクターによる過剰発現系を用いて、これらの遺伝子解析を行う。

Causes of Carryover

3月に参加を予定していた国際学会（EAU2019)への参加が出来なくなった為に次年度使用額が発生。今年度参加予定