2018 Fiscal Year Research-status Report
Super流産の原因遺伝子の同定とヒト妊娠維持メカニズムの解明
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18K09267
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| Research Institution | Nagoya City University |
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Principal Investigator |
杉浦 真弓 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 教授 (30264740)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大石 久史 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 教授 (30375513)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 習慣流産 / 不育症 / 習慣流産原因遺伝子 / RUFY3 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
流死産を繰り返す不育症の原因は抗リン脂質抗体、染色体均衡型転座、子宮奇形、胎児染色体数的異常である。本研究では、真の原因不明で10回以上繰り返す難治性習慣流産Super流産患者とその両親のトリオ解析とマウスゲノム編集による新しい手法により原因遺伝子を同定する。
5家系の全エクソントリオ解析を行った。非同義置換、スプライス変異、ストップゲイン、フレームシフト変異に着目し、各患者に13-27候補遺伝子を絞り込んだ。各家系に共通の遺伝子はみられなかった。TDRD15, RUFY3（家系4）に、PIPTNM1, OR9K2（家系2）にサンガー法により新規変異を確認した。家系1, 4, 7について検体採取を再度行い、成育医療研究センター周産期病態研究部秦健一郎部長により全エクソン解析を行い、研究の方向性についてDiscussionを行った。
RUFY3は、新潟大学五十嵐道弘教授らがRufy3欠損マウス作成を報告したため、共同研究として受精卵の提供を受けた。Rufy3は、スモールGTPaseのアダプタープロテインの一つRap2に結合し、Tiam2/STEFを活性化して、神経極性とアクソン伸長を制御することがわかっている（Honda A et al, J Biol Chem 2017）。全身性のRufy3遺伝子欠損マウスは生直後に死亡してしまうため、ヘテロメスマウスの妊娠、出産について、新潟大学において予備的検討を行った（新潟大が論文準備中）。
Tcf23は、プロゲステロン依存性に子宮内膜間質細胞の脱落膜化に関与することが示唆されている（Kommagani R et al, Biol Reprod 2014）。マウス子宮内膜の免疫染色では、間質細胞特異的にTcf23の発現を認めた。Tcf23遺伝子の機能を調べるために欠損マウスを作製し、ホモ欠損マウスの誕生を確認した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
成育医療研究センター周産期病態研究部（研究協力施設）により、全ゲノム解析を依頼したが、説明不十分のため全エクソン解析となった。4月24日に会議を開催し、全ゲノムの意義を理解していただいた。予算的に2019年度後半になる見通し。
患者6人と両親に全エクソンシークエンスを行ったが、検体不足のために５家系のトリオ解析となった。TDRD15, RUFY3（家系4）、PIPTNM1, OR9K2（家系2）に新規変異を確認した。QRICH2（家系4）、SIKE1, ZNF585A, LAMB4、ZNF77（家系1）はシークエンスの結果変異はなかった。HBQ1, FBXO15（家系6）、ABCA1, SKIDA1, SLIT1, CHD3, DYNAP, MKL1（家系7）のシークエンスは全エクソン解析後にする予定だったため、できていない。
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| Strategy for Future Research Activity |
全ゲノム解析を行う。
IMPC（国際マウス表現型解析コンソーシアム）によると、高齢のTcf23ホモ欠損マウスは、骨密度の低下を示す可能性が示されており、in vivoにおいてもプロゲステロン反応性に関与することが予想されるため、今後、妊孕性等について解析を加える。
マウスゲノム編集による新規変異が原因遺伝子であることの実証：Super流産原因遺伝子が患者ごとに複数認められる可能性を考え、新規変異の確認された遺伝子KOマウスを作成し妊孕性を確認する。Super流産では胎児異常はみられないため、野生型マウスから得られた受精卵を、遺伝子欠損マウスに移植すると不妊であり、逆の移植実験（遺伝子欠損⇒野生型）では出産可能であることを示すことによって、胚の発生障害の原因が母体側にあることを証明する。他の候補遺伝子PIPTNM1, OR9K2（家系2）について欠損マウス作成と妊孕性の確認を行う。
HBQ1, FBXO15（家系6）, family 7-ABCA1, SKIDA1, SLIT1, CHD3, DYNAP, MKL1（家系7）についても新規変異を確認する。
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| Causes of Carryover |
動物実験が計画よりも実施が遅れたため、次年度に使用することにした。
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| Remarks |
名古屋市立大学不育症研究センターは平成27年度から文部科学省共同利用・共同研究拠点に認定されました。平成31年3月30日には第１回日本不育症学会を開催しました。
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