2018 Fiscal Year Research-status Report
腫瘍特異的変異抗原誘導マウスモデルを用いた複合的癌免疫療法の探索
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18K09291
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| Research Institution | Shimane University |
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Principal Investigator |
石川 雅子 島根大学, 学術研究院医学・看護学系, 助教 (50467718)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中山 健太郎 島根大学, 学術研究院医学・看護学系, 准教授 (70346401)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 卵巣癌 / MSI / 免疫チェックポイント関連分子 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
婦人科癌の中でも死亡率の高い卵巣癌において、癌免疫療法の効果予測因子を探索し、より効果的な治療群を見いだすことが本研究の目的となる。申請者らの研究グループは、これまでMSI関連癌が多くみられる子宮体癌において免疫染色でのMismatch repair蛋白（MMR蛋白）発現と免疫チェックポイント関連分子Programmed Cell Death-1(PD-1)とそのリガンド(PD-L1)またCD8の発現量との相関を解析したところ、MSI症例ではCD8陽性率が高く、かつPD-1・PD-L1の陽性率が高いことを証明し、MSI症例はPD-1/PD-L1阻害剤が有効である可能性があり子宮体癌においてMSIの検討はPD-1/PD-L1阻害剤の有効性をあらわすバイオマーカーとなる可能性があることを発見した。本研究ではこれらのバイオマーカーが卵巣癌でも有効なものになりうるか、また組織型ごとに免疫チェックポイント分子を解析し、免疫チェックポイント阻害薬の有効性について検討するべく、解析を進めた。
卵巣癌137例において免疫染色を行い4.3％ (6/137例)でMSIを認めた。さらにMSIと免疫チェックポイント関連分子陽性率との相関を検討したが、統計学的有意差のある相関を認めなかった(MSI/CD8 p=0.187, MSI/PD-1p=0.770, MSI/PD-L1 p=0.443 x二乗検定)。
また「免疫チェックポイント阻害薬・抗癌剤・分子標的治療薬の効果予測モデルの作成」に関して、mutation burden richマウスモデルの作成のため、マウス卵巣癌細胞株(HM-1：A murine ovarian carcinoma cell line)を用い、CRISPR-Cas9でPOLEをノックアウトしPOLEワイルドタイプ、POLEホモ変異、CDDP耐性株を作成した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
免疫チェックポイント関連分子Programmed Cell Death-1(PD-1)とそのリガンド(PD-L1)またCD8発現量といったこれらのバイオマーカーが卵巣癌でも有効なものになりうるか、また組織型ごとに免疫チェックポイント分子を解析し、免疫チェックポイント阻害薬の有効性について検討するべく、解析を進めた。
卵巣癌において免疫染色でのMismatch repair蛋白（MMR蛋白）発現と免疫チェックポイント関連分子PD-1、PD-L1、CD8の発現量との相関を解析した。
卵巣癌137例（1/2期; 48例、3/4期; 89例）（漿液性癌; 77例、粘液性癌; 13例、類内膜癌; 23例、明細胞癌; 24例）において免疫染色を行い4.3％ (6/137例)でMSIを認めた。さらにMSIと免疫チェックポイント関連分子陽性率との相関を検討したが、統計学的有意差のある相関を認めなかった(MSI/CD8 p=0.187, MSI/PD-1p=0.770, MSI/PD-L1 p=0.443 x二乗検定)。
次に「免疫チェックポイント阻害薬・抗癌剤・分子標的治療薬の効果予測モデルの作成」において、mutation burden richな状態のマウスモデルの作成のため、マウス卵巣癌細胞株(HM-1：A murine ovarian carcinoma cell line)を用い、CRISPR-Cas9でPOLEをノックアウトし、A02細胞（POLEワイルドタイプ）、H04(POLEホモ変異)、CDDP耐性株(抗癌剤による化学修飾）を作成した。現在、ウエスタンブロット法で、細胞株の状態を確認できた。
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| Strategy for Future Research Activity |
【mutation burden richな状態のマウスモデルの作成】クリスパーキャス9によるゲノム編集で、POLEを欠失させたマウス卵巣癌細胞株A02細胞（POLEワイルドタイプ）、H04(POLEホモ変異)、CDDP耐性株(抗癌剤による化学修飾）を作成した。今後は下記の予定で実験を進める。
1. 当初の予定通り免疫系が正常なマウスB6C3F1.マウスへの卵巣癌細胞株投与する。2. マウスにできた腫瘍組織を用いてMMR蛋白、PD-L1、PD-1、CD8発現を免疫染色で評価する。3. CDDP耐性株をさらに継代し、マウスエクソーム解析を行いｕｌｔｒａ mutated phenotypeとなっているか検討する。
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