2020 Fiscal Year Research-status Report
Investigation of the role of necroptosis in the inner ear diseases and its application for treatments
| Project/Area Number |
18K09370
|
|---|
| Research Institution | Nagoya City University |
|---|
Principal Investigator |
岩崎 真一 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 教授 (10359606)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
吉川 弥生 東京大学, 医学部附属病院, 届出研究員 (00452350)
樫尾 明憲 東京大学, 医学部附属病院, 講師 (20451809)
藤本 千里 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (60581882)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2022-03-31
|
| Keywords | 蝸牛 / 内耳障害 / アポトーシス / ネクローシス / ネクロプトーシス |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
生後3日の幼弱マウスより摘出した、蝸牛の器官培養を用いて、耳毒性物質ゲンタマイシン（GM）によって誘導される有毛細胞障害について、アポトーシス、ネクローシス、ネクロプトーシスの関与について解析を行った。
0.3～1 mMのGMを投与し、6～12時間培養し、Propidium iodide (PI)による核染色とmyosin 7Aによる有毛細胞染色、DAPIによる核染色を行い、有毛細胞障害について検討を行った。GMによる有毛細胞障害は、濃度および時間依存的に変化した。0.6 mM GM下において、PIによる核染色では、12時間の培養では、核が空砲化するネクローシスと、核が濃縮するアポトーシスが混在したが、24時間培養では、アポトーシスが優位であった。また、障害された有毛細胞は、RIP1, RIP2およびcaspase-8, caspase-9での染色がみられ、ネクロプトーシス、アポトーシスいずれの障害経路も関与することを示唆する所見であった。
アポトーシスの阻害薬であるZVADとネクロプトーシスの阻害薬であるNec-1存在下にGMを投与したところ、いずれの阻害剤においても、GMによる有毛細胞障害が部分的に阻害された。
現在、ZVAD、Nec-1による、アポトーシスとネクロプトーシスの阻害効果について、RIP1, RIP2およびcaspase-8, caspase-9の免疫染色による評価を行っているところである。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
幼弱マウスよからの蝸牛摘出、器官培養、ゲンタマイシンによる有毛細胞障害の評価系については、順調に行われている。また、PIによる核染色、ZVAD、Nec-1による、アポトーシスとネクロプトーシスの阻害効果についても、既に評価済みであるが、RIP-1, RIP-3の免疫染色が安定せず、条件を様々に変えて、試行錯誤を繰り返している。
|
| Strategy for Future Research Activity |
ZVAD、Nec-1による、アポトーシスとネクロプトーシスの阻害効果について、RIP-1, RIP-3をはじめとする免疫染色について、条件を様々に変えて、安定した条件を見出し、阻害経路について明らかにする。
|
| Causes of Carryover |
新型コロナウイルスの影響で、予定していた海外の学会出張などが、ウェブ会議となったため。また、免疫染色の実験が予定通り進まないため、予定していた抗体や試薬の使用量が予定より少なかったため。
|
