2020 Fiscal Year Research-status Report
成熟内耳を標的としたGJB2変異型難聴への遺伝子治療法の開発
| Project/Area Number |
18K09387
|
|---|
| Research Institution | Juntendo University |
|---|
Principal Investigator |
飯塚 崇 順天堂大学, 医学部, 非常勤助教 (40372932)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
神谷 和作 順天堂大学, 医学部, 准教授 (10374159)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2023-03-31
|
| Keywords | 遺伝性難聴 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
遺伝性難聴は1600出生に一人と高頻度に発生するが、その根本的治療法はなく次世代の治療法開発が期待されている。遺伝性難聴の原因遺伝子として世界中で圧倒的に検出頻度が高いのがギャップ結合タンパク質Connexin (CX) 26をコードするGJB2遺伝子である。CX26は蝸牛ギャップ結合の主要構成要素として蝸牛リンパ液のイオン組成を高電位に維持することで音の振動から神経活動への変換を可能としている。
申請者はアデノ随伴ウィルス（AAV）ベクターを用いたCX26欠損マウス内耳への遺伝子治療実験により、CX26欠損マウスにおける高度難聴を優位に回復させることに初めて成功した。しかし、この実験において聴力回復に成功したマウスは生後0日齢であり、ヒトの内耳では胎生期に相当する。当時の方法による遺伝子治療法では成熟マウスの聴力回復には至らなかった。本研究ではベクター投与法を改良することによりヒト臨床応用への対象として現実的である成熟マウスでの聴力回復を実現させる新たな遺伝子導入法の開発を目指す。当該年度は従来型のAAV1-Gjb2との比較実験により感染能と感染指向性の解析をおこなった。生後4日齢のマウスから蝸牛を摘出し、蝸牛器官培養を行った。この培養系にて既存の血清型AAVでのin vitro感染を行った。これにより標的細胞への感染効率の良いベクターを選抜した。蝸牛器官培養での結果を元にAAVベクターの配列を比較し標的細胞であるCX26ギャップ結合形成細胞への効率の良いベクターが選抜された。このAAVベクターをマウス蝸牛に効率よく導入するための投与法の検討を行い5～10ulのウィルス液を効率よく外リンパ液へ導入する手技を確立した。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
昨年度より行われているコロナウィルスの感染状況による動物施設工事の遅れに伴い実験動物の繁殖に遅れが生じているため。
|
| Strategy for Future Research Activity |
遅れていた実験動物施設の工事が完了し、実験動物の手術設備、および聴力解析システムの再セッティングを行っている。これにより早期に実験動物の数を確保し遺伝子導入実験および聴力解析実験を施設工事前の状態に復帰させる。
|
| Causes of Carryover |
昨年度まで続いた施設工事により実験動物作製に遅れが生じ、予定していた対象マウスの繁殖が進まず、それに伴い消耗品の消費が少なくなった。施設工事が終了したため、今後は関連する消耗品の購入に使用する予定である。
|
Research Products
(5 results)
