ゲノム編集技術を用いた網膜における長寿遺伝子の機能解明：加齢黄斑変性の予防戦略

2019 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 18K09410
• Research Institution: Okayama University
• Principal Investigator: 森實 祐基 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 准教授 (50432646)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 大内 淑代 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 教授 (00253229) ; 米澤 朋子 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 助教 (30304299)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: 加齢黄斑変性

Outline of Annual Research Achievements

加齢黄斑変性(Age-related macular degeneration,以下AMD)は失明に至る難治性の眼疾患であり,加齢を背景とした網膜色素上皮細胞(以下RPE)の機能低下(老化) が原因で発症する。申請者はこれまでに,長寿遺伝子の一つであるAMP活性化プロテインキナーぜ(以下AMPK)に着目し,その活性を薬剤によって変化させ、AMPKの 活性化が様々な眼疾患の病態を改善することを明らかにしてきた。しかし,AMPKやその他の長寿遺伝子が網膜やRPEの老化に及ぼす影響は不明であり,また、薬剤 の非特異的作用のために,長寿遺伝子の真の機能を検討することが困難であるという問題があった。そこで本研究では,主要な長寿遺伝子であるサーチュイン(以下SIRT)とAMPKに着目し,これらの遺伝子が網膜やRPEの老化に及ぼす影響を,ゲノム編集技術を用いて作成した遺伝子改変RPEおよびマウスを用いて明らかにす る。そして,十分な治療法が存在しない加齢黄斑変性の新規予防法を開発するための基盤となる成果を得る。 上記の目的を達成するために当該年度は、SIRT遺伝子に着目し、CRISPR/Cas9等のゲノム編集技術を用いてiPS細胞のSIRT遺伝子のゲノム編集を行い、目的とする遺伝子が編集されていることを確認した。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

iPS細胞のSIRT遺伝子のゲノム編集には成功したが、iPS細胞の単離と網膜色素上皮細胞への分化に時間を要しているため。

Strategy for Future Research Activity

SIRT遺伝子のゲノム編集を行ったiPS細胞の培養条件の検討、スケールアップを行い、培養に要する時間を短縮する。また、対象とする編集遺伝子を他にも複数選択し同時進行で実験を進める。

Causes of Carryover

実験消耗品が予定よりも安価に済んだため次年度使用額が生じた。これについては次年度に物品費として使用予定である。