2019 Fiscal Year Research-status Report
共焦点眼底鏡による緑色光励起眼底自発蛍光を用いた黄斑疾患の機能評価と病態解明
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18K09456
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| Research Institution | Kyorin University |
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Principal Investigator |
井上 真 杏林大学, 医学部, 教授 (20232556)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
伊東 裕二 杏林大学, 医学部, 講師 (00625569)
慶野 博 杏林大学, 医学部, 准教授 (90328211)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 眼底自発蛍光 / 黄斑円孔 / 黄斑前膜 / 黄斑色素 / リポフスチン |
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| Outline of Annual Research Achievements |
眼底自発蛍光は主にリポフスチンという視細胞の代謝産物から発せられると考えられている。黄斑疾患において眼底自発蛍光の役割の研究が行われているが、黄斑部が持つ黄斑色素が青色光による自発蛍光をブロックするため黄斑疾患における機能評価が困難であった。そこで緑色光を利用した自発蛍光を用いることで、より正確な黄斑機能評価ができるかを黄斑疾患に対する手術を行った症例で検討する。本研究では、黄斑前膜、黄斑円孔、分層黄斑円孔、黄斑牽引症候群等の黄斑疾患で青色光と緑色光の眼底自発蛍光を撮像して比較する。視神経乳頭上はリポフスチンが存在せず自発蛍光がないと考えられ、今回の研究では黄斑部の自発蛍光を視神経乳頭上の自発蛍光の輝度と比較することで定量的な評価を行う。
並行して摘出眼球における組織切片での蛍光部位の同定に関する実験と培養細胞による実験を行う。Human Eye Biobankから提供された、黄斑前膜、黄斑円孔を有する患者の病理切片での自発蛍光を蛍光顕微鏡で観察して、年齢をマッチさせたコントロールと比較する。培養網膜色素上皮細胞では網膜色素上皮細胞のみの自発蛍光しか観察されないが、摘出眼球であると経年的変化や黄斑前膜や黄斑円孔による感覚網膜の変化、更には視細胞外層の変化による波長の異なる自発蛍光の変化を観察できるという利点がある。
市販ヒト網膜色素上皮細胞株（ARPE-19、ATCC社）を用いる。細胞のリボゾーム内のリポフスチン顆粒はSudan black B染色、および蛍光顕微鏡、AGE (Advanced Glycation End Products)は抗AGE抗体による免疫染色で確認する。蛍光顕微鏡の励起光の中の青色光（Blue励起）、緑色光（Green励起）を用いて細胞内の蛍光物質の局在がリポフスチン顆粒と一致するかを検討する。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本研究では、黄斑前膜、黄斑円孔、分層黄斑円孔、黄斑牽引症候群等の黄斑疾患で青色光と緑色光の眼底自発蛍光を比較して研究する。すでに50症例分の画像が蓄積できていて解析を予定している。Human Eye Biobankから黄斑前膜1眼、黄斑円孔1眼とエイジマッチしたコントロールの5眼のヒト眼球切片を発送してもらった。最近蛍光顕微鏡が使用可能になっていたため、切片での自発蛍光の測定を行う予定である。
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| Strategy for Future Research Activity |
本研究では、黄斑前膜、黄斑円孔、分層黄斑円孔、黄斑牽引症候群等の黄斑疾患で青色光と緑色光の眼底自発蛍光を撮像して比較する。これらの疾患で硝子体手術を行った症例に対して青色の眼底自発蛍光はHeidelberg社製SpectralisのHRA2を用いて撮像し、緑色の眼底自発蛍光はOptos社製超広角眼底撮影装置Optos200Txのリゾマックスモードで撮像した。それぞれ術前、術1か月後、3か月後、6か月後でOCTと共に撮像を行った。すでに50症例分の画像が蓄積できていて解析を予定している。術前後の視力変化だけではなく、OCTのパラメーターであるEllipsoid zoneラインやInterdigitation zoneラインの欠損幅との比較も行う。
Human Eye Biobankを主催しているトロント大学眼科病理学のYeni Yucel教授から黄斑前膜1眼、黄斑円孔1眼とエイジマッチしたコントロールの5眼の切片を発送してもらった。共同研究施設の改装とコロナウイルスのパンデミックの影響で蛍光顕微鏡が使用禁止になっていたが最近になって使用できるようになり切片での自発蛍光の測定を行う予定である。また同時にリポフスチンと蛍光発生部位との相関を見るため免疫染色での検討も行う。培養細胞での実験はこれらの研究で得られた結果を元にするため、その後に予定している。
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| Causes of Carryover |
昨年度は学会に出席して情報収集や関連疾患の研究を行っている研究者との情報交換や討論を行っていた。また予定していたヒト組織の病理切片の蓄積と発送手続きに時間を要したが蛍光顕微鏡での実験を行う予定である。その間は関連疾患における下記の発表、論文の執筆を行っていた。本研究の臨床研究に症例の追加収集を行っていたが必要症例数に到達したと考えられ、今後検討を行っていく。
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[Presentation] Subretinal fluid to close refractory full thickness macula holes: a global perspective.2019
Author(s)
Meyer CH, Rodrigues EB, Haritoglou C, Ryan EH, Inoue M, Maia M, Hillenkamp J, Alezzandrini A. Szurmann P, Lytvynchuk L, Zas M, Wachtlin J, Mennel S, Pringlinger S, Gotzaridis S, Rezende F, Ruban A, Andrade G, Maier M, Sohn EH, Wolf A, Koss M.
Organizer
AAO
Int'l Joint Research
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