2020 Fiscal Year Research-status Report
乳児血管腫におけるstem cellの関与 ～増殖・分化制御機構の解明～
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18K09481
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| Research Institution | Kobe University |
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Principal Investigator |
櫻井 沙由理 (大澤) 神戸大学, 医学部附属病院, 助教 (20594534)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
野村 正 神戸大学, 医学部附属病院, 特命講師 (30529566)
大崎 健夫 神戸大学, 医学部附属病院, 特定助教 (30444582)
榊原 俊介 神戸大学, 医学研究科, 客員准教授 (50444592)
寺師 浩人 神戸大学, 医学部附属病院, 教授 (80217421)
橋川 和信 神戸大学, 医学部附属病院, 医学研究員 (90403237)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 乳児血管腫 / 脈管性腫瘍 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
乳児の増殖期は，未分化な血管内皮細胞の高度な細胞増殖によって特徴付けられる。一方，退縮期に入ると，血管内皮細胞は徐々に減少して，比較的口径の大きな血管に変化し，それとともに周囲に脂肪組織が増えていく。このような，退縮期での脂肪組織への置換は極めてユニークな生物学的変化であり，このように振る舞う固形腫瘍は存在しない。このIHの主体をなす血管内皮細胞は分化能を有する未分化な細胞から構成されている。このような独自の特徴をもつIHの血管内皮細胞のうち，幹細胞マーカーであるCD133による分離によって得られる乳児血管腫由来幹細胞（hemangioma-derived stem cell；HemSCと略す）は脂肪，骨や神経に分化する多分化能を有することが既に証明されている。しかしHemSCがIHの増殖や退縮にどのように関わっているかは今なお不明である。われわれは，IHの増殖や退縮においてHemSCがまさに「司令塔」としての役割を果たしているとの仮説を立て，増殖期あるいは退縮期において，「どのような制御下であるいは生化学的刺激によって，HemSCが乳児血管腫の増殖や退縮に関わっているのか？」という命題を立てた．増殖期の乳児血管腫よりサンプルを採取し，Fluoresceinisothiocyanate（FITC）ラベルのCD133抗体を用いたflow cytometryでは細胞を単離することができず，explant法で細胞培養を行った．Explant法では乳児血管腫よりHemSCが得られ，複数のサンプルをストックすることができた．またMTTアッセイで増殖能を確認した。固定標本に対してはGlut1免疫染色で染色を確認した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
2020年は新型コロナウイルス感染症の影響もあり、組織化学的な検討に遅延が生じたことに加え、検体採取に必要な手術件数が減少したため、計画より遅延している。
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| Strategy for Future Research Activity |
代表ならびに分担研究者はこれまで脈管奇形に対するexplant法での初代培養の経験が豊富であり，方針を変更して、本法での初代培養を適用した。Explant法では乳児血管腫よりHemSCが得られ，複数のサンプルをストックすることができた。本年も新型コロナウイルスの影響が予想されることから新規手術検体を得ることは困難なため、現有のサンプルを用いて実験を継続する予定である。具体的には、細胞遊走アッセイシステムを用い、多孔性のチャンバー膜の上面に細胞浮遊液を滴下し，膜の下にはHemSCを培
養した上清を添加したmediumを入れ、24、48時間の培養の後、内皮細胞を細胞数を計測する。対照群 と比較してHemSCに対する走化性を確認する。Flt-1の発現
についてreal-time PCRを用いて定量的に検討することを計画している。
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| Causes of Carryover |
新型コロナウイルス感染症の影響により、対象疾患手術症例の減少とそれに伴う手術サンプルの取得の減少、共同実験施設の使用制限、実験補佐員の雇用困難など複数の要因が重なり、2020年度は実験が遅延した。今年度は手術件数も増加する見込みであり、2020年の計画を遂行できると考えている。
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