2021 Fiscal Year Annual Research Report
Search for matrix proteins that regulate calcification by analyzing degradome for calcified tissues of MMP 2 - deficient mice
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18K09517
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| Research Institution | Tohoku University |
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Principal Investigator |
笹野 泰之 東北大学, 歯学研究科, 教授 (30196191)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
鈴木 治 東北大学, 歯学研究科, 教授 (60374948)
矢尾 育子 浜松医科大学, 光尖端医学教育研究センター, 准教授 (60399681)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | MMP-2欠損マウス / 骨 / 軟骨 / 石灰化 / マイクロX線CT / エネルギー分散型X線分析 / 基質タンパク |
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| Outline of Annual Research Achievements |
骨の石灰化に際しMMP-2で分解される「石灰化制御基質タンパク」を探索することを本研究の目的とする。平成３０年度にMMP-2欠損マウス（GelA KO）を理研バイオリソース研究センター（理研BRC）から導入し、繁殖を開始した。令和元年度では、下記のように、生後７週齢を中心に、２週齢、１２週齢および２４週齢のMMP-2欠損（-/-）および野生型（+/+）のマウスを全身麻酔下に4%パラホルムアルデヒドまたは4%パラホルムアルデヒド-1%グルタールアルデヒドで灌流固定した。
2週齢 雄 -/- 3個体 +/+ 2個体; 雌 -/- 1個体 +/+ 0個体; ７ 週齢 雄 -/- 11個体 +/+ 10個体; 雌 -/- 9個体 +/+ 4個体; 15週齢 雄 -/- 1個体 +/+ 1個体； 雌 -/- 1個体 +/+ 1個体; 24週齢 雌 -/- 3個体 +/+ 1個体
令和３年度は、固定した下肢骨（脛骨）の試料について、マイクロX線CTと分析走査電子顕微鏡を用いたエネルギー分散型X線分析（SEM-EDX）による元素分析で検討した。生後７週齢の脛骨におけるマイクロX線CT解析の結果、MMP-2欠損マウスの緻密骨の骨密度は野生型に比較して有意に低かった。また、SEM-EDXによる元素分析（点分析）の結果では、緻密骨におけるカルシウム濃度、リン濃度、炭素濃度に有意な差は認められなかった。一部の試料は10%EDTAで脱灰し、パラフィン包埋試料とし、パラフィン切片はヘマトキシリンーエオジンまたはアルシアンブルーで染色した。生後24週齢の試料において、MMP-2欠損マウスでは、成長板軟骨と関節軟骨で野生型マウスに比較して細胞密度が高く、またアルシアンブルーの染色性が高かった。
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