2018 Fiscal Year Research-status Report
Investigation of saliva effect on intestinal immune response based on intestinal flora analysis
| Project/Area Number |
18K09543
|
|---|
| Research Institution | Tsurumi University |
|---|
Principal Investigator |
川口 浩司 鶴見大学, 歯学部, 准教授 (50277951)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
藤原 久子 鶴見大学短期大学部, 歯科衛生科, 准教授 (80396746)
熊谷 賢一 鶴見大学, 歯学部, 助教 (10518129)
濱田 良樹 鶴見大学, 歯学部, 教授 (70247336)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
|
| Keywords | 唾液 / 菌叢解析 / 腸内細菌叢 / 腸管免疫応答 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
まずC57BL/6マウス（オス、８週令）を用いて、大唾液腺（顎下腺・舌下腺・耳下腺）摘出マウスをを作出した。予定としては、術後1, 3, 6, 12, 18か月目に解析を行うことにしていることから、まず１８か月後ならびに１２か月後に解析する予定のマウスを作出した。唾液腺の摘出は、林らの方法(歯基礎誌 22:454-464, 1980)に則って、顎下腺・舌下腺・耳下腺の全てを摘出した。一方、コントロール群として、無処置マウスではなくシャムオペ群を作出した。方法としては、前頸部から胸郭上方までの切開と頬部への剥離のみを行った。
唾液腺マウスの全身的な解析を行う前のwaiting期間には、①唾液量、②体重、③飲水量、④食餌量の経時的推移を１か月ごとに計測した。その結果、唾液腺摘出マウスは唾液量分泌量は有意に減少したが、体重、飲水量、食事量については術後４か月経過した現在、２群間の有意鎖は認められない。また、術後３か月経過したマウスについては、腸管粘膜の組織学的変化・腸粘膜免疫応答関連因子の発現の経時的解析をうために、N=5ずつ検体採取を行ったところである。組織学的解析の対象臓器は、①空腸、②回腸、③大腸、④舌、⑤腎臓、⑥肝臓、⑦脾臓、⑧膵臓、菌叢解析の対象は、①糞便、②唾液である。これらの検体を用いてHE染色を行い、唾液腺摘出マウスとシャムオペマウスの比較検証を進めており、現在、それぞれの組織変化の解析を邁進中である。さらに、マウスの血液について、血算・生化学検査を行った。そちらについても、２群間の比較検証を進めている。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
現段階ではテクニカルな問題はないが、前年に行ったパイロット実験の引継ぎが手続き上滞ったため、新規実験開始が遅れ、１０月より実験を開始した。
手続きを待っている間に、パイロット実験のサンプルを用いて、①糞便からのRNA採取の手法の確立、②免疫組織学的解析用の抗体の選定、③ならびに免疫染色方法の条件設定の３つを行っていた。
|
| Strategy for Future Research Activity |
研究の開始は予定より遅れたが、本研究に先立って行ったパイロット実験のサンプルを使って、①糞便からのRNA採取の手法の確立、②免疫組織学的解析用の抗体の選定、③ならびに免疫染色方法の条件設定の３つを行い、条件設定の確立が出来ている。通常、免疫染色方法における抗体染色においては、条件設定がうまく行かずに難儀することが多々あるが、すでにその問題はクリアされていることから、研究がスタートした現在、特に障害になるような事柄は考えにくい。
更に令和元年度より、大学院生１名が研究に参画することとなった。研究グループの人数が増えることによって、トータルのタスク量が増えると予想されることから、やや遅れている研究の進捗の巻き返しを期待できると考えている。
|
| Causes of Carryover |
前述したように、研究の開始そのものが遅れたため、その分の繰越金が生じた。ただし、waiting期間中に解析の条件設定をおこなっていたため、最終的な研究の終了には支障がないと考えている。
本年度使用額に生じた余りについては、次年度の研究で予定通り使用する。
|
