2018 Fiscal Year Research-status Report
The induced RNA-binding protein, HuR targets of IL-6 mRNA and enhances its stabilization in periodontitis
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18K09599
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
應原 一久 広島大学, 医歯薬保健学研究科(歯), 助教 (80550425)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小澤 龍彦 富山大学, 大学院医学薬学研究部(医学), 助教 (10432105)
杉山 英二 広島大学, 病院(医), 教授 (70179167)
藤田 剛 広島大学, 医歯薬保健学研究科(歯), 准教授 (80379883)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 歯周炎 / RNA binding protein / マウス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は、歯周炎が関節リウマチ（RA）増悪に与える因子を明らかにするために、
①歯周病原細菌P. gingivalisによって誘導されたmRNA結合タンパクHuRによるIL-6 mRNAの安定化がIL-6分泌量を増加させ、歯周炎、RA両方の疾患の病態形成に関与していることを明らかにする
②HuR増加によって誘導されたIL-6が分泌促進させる破骨細胞活性化因子sRANKLが引き起こす、関節組織や、歯周組織の破骨細胞活性化にも着目する。特にRA患者で上昇するシトルリン化タンパクとこれに結合する抗CCP抗体から生成される免疫複合体が骨破壊に影響することを明らかにすることである。
本年度は①については、IL-6 mRNA活性化をluciferase assayで評価する系を用いて不死化歯肉上皮細胞株OBA-9でP. gingivalis刺激、サイトカイン刺激でHuRがmRNAレベル、タンパクレベルで誘導されることを確認した。また、細胞にHuRを強制発現させることで、HuRがmRNA末端に結合し、IL-6 mRNA分解を抑制していることをmRNA、タンパクレベル突き止めた。さらに歯周炎患者の組織を免疫染色することで、HuRが炎症部位に特異的に発言していることも突き止めた。次年度以降は、②についてはRAモデルマウスを確立し、患者由来B細胞より単離したmRNAからin vitroで合成した抗CCPモノクローナル抗体（確立済）を用いた実験系で検討する。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究予定期間のうち１年めが終了し、実験計画として計画①HuRを介したIL-6 mRNA安定化メカニズムをin vitro実験系で明らかにする、計画②HuRを介したIL-6 mRNA安定化のRA発症
への影響をin vivoで明らかにする、計画③歯周組織でPgCPと抗CCP抗体で構成される免疫複合体が増加することを明らかにする、計画④CP、抗CCP抗体で構成されるICの破骨細胞分化への関与をin vitroで明らかにする、計画⑤ICのRA臨床症状悪化メカニズムをマウスモデルで明らかにする。以上のことを予定していたが、当初の予定通り平成30年度は計画①、③、が終了した。
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| Strategy for Future Research Activity |
実験計画として計画①HuRを介したIL-6 mRNA安定化メカニズムをin vitro実験系で明らかにする、計画②HuRを介したIL-6 mRNA安定化のRA発症への影響をin vivoで明らかにする、計画③歯周組織でPgCPと抗CCP抗体で構成される免疫複合体が増加することを明らかにする、計画④CP、抗CCP抗体で構成されるICの破骨細胞分化への関与をin vitroで明らかにする、計画⑤ICのRA臨床症状悪化メカニズムをマウスモデルで明らかにする。以上のことを予定していたが、今後は計画②、④、⑤を実施予定である。
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| Causes of Carryover |
動物実験を予定していたが、当初予定していた結果が長期飼育ではなく、短期間で得られたために、追加の動物実験が必要なくなったため。次年度以降にRA治療で使用されている薬剤の効果を歯周炎発症RA治療でモデルマウスで検討する実験で使用予定である。
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