2019 Fiscal Year Research-status Report
睡眠時ブラキシズム特異的iPS細胞によるGABA作動性神経伝達機構の検討
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18K09709
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| Research Institution | Showa University |
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Principal Investigator |
安部 友佳 昭和大学, 歯学部, 講師 (80614156)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 睡眠時ブラキシズム / iPS細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
研究者は先行研究で睡眠時ブラキシズム(SB)とセロトニン(5-HT)2A受容体遺伝子(HTR2A)の一塩基多型(SNP)との関連を報告し，細胞レベルでのSB発症メカニズム解明を目標として，睡眠時ブラキシズム患者および対照者よりiPS細胞を樹立し，5-HT 2A受容体を発現する神経細胞の誘導法確立に成功している．本研究は，睡眠時ブラキシズム特異的iPS細胞を樹立してGABA作動性ニューロンへ誘導し，in vitroで電気生理学的な表現型の検証を行い，睡眠時ブラキシズム発症の機序解明を目指すものである．先行の睡眠時ブラキシズム臨床研究で登録された被験者のうち睡眠ポリグラフ検査で確定診断のついたSB患者・対照者から，研究の趣旨を説明し同意を得た被験者のサンプルを使用した．ゲノムDNAをもとにSBリスク因子であるHTR2AのSNP(rs6313)の遺伝子型を解析し，リスクアレル(rs6313，C allele)を有するSB群，有しないコントロール群をそれぞれ設定した．さらに，iPS細胞を樹立し，これらのiPS細胞に対して標的神経細胞を可視化するためのレポーターレンチウイルスを導入した．小分子化合物を用いて行う領域特異的神経誘導法を応用し，GABA作動性ニューロンを含む神経細胞を分化誘導した．誘導した神経細胞をフローサイトメトリーにより解析・分別し，また，RT-PCRによりHTR2A発現量を検討した．SB・コントロール群間でGABA作動性ニューロンの生理学的な機能等を指標とした表現型の違いを検討するため，まずはコントロール群のサンプルを対象に電気生理学的解析を行い，蛍光標識されたニューロンの活動電位発生について検討した．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
iPS細胞から分化誘導したニューロンの中からGABA作動性ニューロンを標識するためのレンチウイルス作成のために時間を要しており，若干の遅れが生じている．
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| Strategy for Future Research Activity |
神経生理学的評価のためのパッチクランプ法の技術的精度向上を図りつつ，GABA作動性ニューロンを標識するためのレンチウイルス作成を進めていく．さらに，コントロール群だけではなく，ブラキシズム群・対照群間で，GABA作動性ニューロンの生理学的な機能等を指標とした表現型の違いを比較検討していく予定である.また，ニューロンに対しては，アンタゴニストを適用した際の反応性等についても検討を予定している.
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| Causes of Carryover |
ターゲットニューロン可視化のためのレンチウイルスの開発がやや遅れているため，試薬の使用タイミングを考慮してiPS細胞の分化誘導に用いる予定であった試薬を未購入としたため，次年度使用額が生じた．これは，次年度にiPS細胞の分化誘導およびニューロンの生理学的解析，成果の取りまとめのために使用することを予定している．
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Research Products
(5 results)
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[Presentation] Patch-clamp recordings of neurons induced from sleep bruxism patient-specific iPSCs2019
Author(s)
Nakai K, Abe Y, Hoashi Y, Nakamura S, Shiga T, Avijite K S, Yasuhara R, Matsumoto T, Kotani K, Inoue T, Mishima K, Akamatsu W, Baba K
Organizer
97th General Session & Exhibition of the IADR
Int'l Joint Research
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[Presentation] Electrophysiological recordings of neurons derived from sleep bruxism patient-specific iPSCs2019
Author(s)
Nakai K, Abe Y, Shiga T, Hoashi Y, Nakamura S, Avijite K S, Yasuhara R, Matsumoto T, Kotani K, Inoue T, Mishima K, Akamatsu W, Baba K
Organizer
ISSCR 2019 Annual Meeting
Int'l Joint Research
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[Presentation] 睡眠時ブラキシズム特異的iPS細胞由来GABA作動性神経細胞の電気生理学的評価2019
Author(s)
中井健人, 安部友佳, 帆足有理恵, Avijite Kumer Sarkar, 小溪啓介, 松本貴志, 安原理佳, 美島健二, 中村史朗, 井上富雄, 志賀孝宏, 赤松和土, 馬場一美
Organizer
日本補綴歯科学会 第128回学術大会
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