2020 Fiscal Year Research-status Report
ALP活性に依存するリン酸による歯根膜線維芽細胞の分化機序に関する基礎研究
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18K09848
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| Research Institution | Tsurumi University |
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Principal Investigator |
石川 美佐緒 鶴見大学, 歯学部, 助教 (90582445)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
下田 信治 鶴見大学, 歯学部, 教授 (30139620)
菅崎 弘幸 鶴見大学, 歯学部, 准教授 (30333826)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 歯根膜線維芽細胞 / ナトリウム依存性リン酸トランスポーター / リン酸 / 高リン血症モデルラット |
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| Outline of Annual Research Achievements |
これまでの研究で決定した３種類の培養条件で培養をおこなった歯根膜線維芽細胞の骨芽細胞分化マーカーの発現について、昨年度におこなったリアルタイムRT-PCR法を用いた経時的な発現量の測定結果を踏まえ、本年度は、さらに経時的なタンパク発現の観察をおこなうことで骨芽細胞への分化機序を考察することを目的として研究をおこなった。
これまでの研究で決定している３種類の培養条件（通常培養、石灰化誘導培養、石灰化誘導培養にフォスフォノギ酸を添加）で歯根膜線維芽細胞の培養をおこない、経時的（培養開始３・７日後）にタンパク質を抽出した。そのサンプルを用いて骨芽細胞分化マーカー（アルカリフォスファターゼ、オステオポンチン ）の発現について、Western blotting法にて発現の観察をおこなった。
その結果、石灰化誘導培養を開始して３日後ではアルカリフォスファターゼが、フォスフォノギ酸を添加培養したものと比べて強く発現し、７日後でも同じ傾向を示した。オステオポンチンにおいても、石灰化誘導培養にフォスフォノギ酸を添加し培養を開始したものでは、その発現が明らかに抑えられていた。この結果から、歯根膜線維芽細胞内へのリン酸の流入が歯根膜線維芽細胞の分化にタンパクレベルでも影響を及ぼしてる可能性を示した。
また、昨年度からin vivo研究を含めた計画への変更を検討し、本年度から高リン血症モデルラット（尿毒症：石灰化モデルラット）の基盤的なデータをとるために研究を開始した。
初めに、高リン血症モデルラットの作製のために0.75％アデニン含有食の給餌を４週間おこない、その体内での組織学的変化の観察をおこなった。渉猟しうる限りの論文検索から、本研究でも同様の石灰化変性が大動脈を中心に起きていることから、現在、歯根膜に焦点を当てて観察を始めたばかりである。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
本年度は昨年度から続けていた培養細胞を用いた実験を予定していたが、COVID-19による緊急事態宣言に伴い大学教育が遠隔授業へ変わり、その準備のために時間を費やすことになってしまったため。また、勤務体制の変化から継続的な培養実験が難しい状態であり、研究計画の変更を余儀なくされたため。
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| Strategy for Future Research Activity |
次年度はこれまでのin vitro研究結果を踏まえて、本年度から開始しているin vivo研究の高リン血症モデルラット（尿毒症：石灰化モデルラット）を用いて、歯根膜における変化をナトリウム依存性リン酸トランスポーターの発現に焦点を当てて多面的に評価していきたい。
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| Causes of Carryover |
本年度は、COVID-19による緊急事態宣言に伴い研究を継続的に進めることが出来ず研究試薬の購入が減ったため、使用額に差額が生じた。次年度は、研究計画の変更によりモデルラットを用いた研究をおこなっていく予定のため、実験動物の購入や論文の投稿料に使用する予定である。
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