2019 Fiscal Year Annual Research Report
Development of cell type-specific in vitro gene function analysis system in mouse ovary
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18K14571
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| Research Institution | Tokyo University of Agriculture |
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Principal Investigator |
佐々木 恵亮 東京農業大学, 生命科学部, 研究員 (10737159)
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2018-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | レンチウイルスベクター / 卵巣 / 卵母細胞 / 顆粒層細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1) 卵母細胞特異的に感染するレンチウイルスベクターの開発：本研究計画では、卵巣において顆粒層細胞で発現するSCFおよび卵母細胞で発現するc-Kitのリガンド－レセプターの関係を利用し、マウス卵巣における卵特異的な遺伝子導入を計るものである。前年度に作製した膜貫通型SCFをエンベロープに付随させたレンチウイルス(SCF-LV)はマウス卵巣におけるいずれの細胞に対しても感染性を示さなかった。これはパントロピックなエンベロープ構成因子であるVSV-Gを欠失したためだと考えられた。そこで、令和元年度は完全なVSV-Gを付与したウイルス (SCF-G-LV)、細胞外ドメインを欠失したVSV-Gを付与したウイルス(SCF-GS-LV)等を作製し、卵巣への感染実験を行った。しかしながら、いずれの場合も卵母細胞特異的な遺伝子導入は認められなかった。これらの改変型レンチウイルスの感染には嗜好性がみられ、とくに線維芽細胞様の体細胞に優勢に感染した。
2) ウイルス感染卵巣の器官培養：前年度までに構築した培養系の改変を行った。本培養系では酵素処理によって卵巣組織を分散し、試験管内で再構成した再構築卵巣を器官培養するが、これにより得られる卵胞は非常に貧弱であった。磁気細胞分離法によるCD31陽性細胞の除去および培養液の血清濃度を変更することで間質系細胞の過増殖を抑え、より強固な卵胞構造の形成を促すことができた。これによって二次卵胞の容易な単離が可能となり、その後の卵胞培養に耐えうる成長期卵母細胞数の増加につながった。
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