2019 Fiscal Year Research-status Report
イヌSurvivin抗原を利用したペプチドワクチン療法に関する基礎的研究
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18K14584
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| Research Institution | Tottori University |
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Principal Investigator |
山下 真路 鳥取大学, 農学部, 特命助教 (60813409)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | イヌ / survivin / がんワクチン |
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| Outline of Annual Research Achievements |
これまでにイヌの腫瘍細胞及び、自然発症癌の腫瘍組織におけるSurvivinの遺伝子発現を確認している。さらにイヌのペプチドワクチン開発に向けて、遺伝子のサブクローニング及び、DNAシークエンス技術を用いて、イヌのMHCclassⅠのDLA-88遺伝子のハプロタイプを判別する手技を確立した。TOPOクローニングキットを用いてcDNAからDLA-88遺伝子をサブクローニングし、DNAシークエンスにて塩基配列を解析した。解析した配列をNCBIのBLASTを用いて既存のDLA-88のハプロタイプと照合し、各実験犬の型を確認した。その結果、実験に供するビーグル犬９頭のうち、5頭がDLA-88 novel41のホモであることを確認し、その他の3頭はnovel41とその他のハプロタイプのヘテロであり、novel41を有していない犬は1頭のみであった。
さらに、アミノ酸配列決定に必要な技術であるELISpot assayの実験系の条件の検討を行った。ELISpot assayを用いて、survivinのアミノ酸配列中のDLA-88 novel41におけるエピトープを確認することが、本実験の目的であるが、イヌの癌抗原を用いたELISpot assayの報告はこれまで行われていない。そのためELISpot assayの実験系を設定することが必要である。実験に供しているイヌは法律に則り、狂犬病ワクチンの投与が行われているため、狂犬病をポジティブコントロールにすることが適当と考えられた。現在、この抗原を使用して感作させたリンパ球のELISpot assayの実験系を検討しており、その要請コントロールにはPMA・Inomycin感作を利用しており、検出が可能となった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
イヌの免疫細胞を使用したELISpot assayはこれまでにも行われ、発表もされているが、腫瘍免疫を使用した実験系はこれまでに行われていない。そのため、適切なポジティブコントロールを検討する必要があった。本研究では狂犬病抗原を使用したものをポジティブコントロールと設定しているが、これを用いた実験系の調整に時間がかかっている。また、1回の実験に3週間ほどかかってしまうこともやや遅れている原因である。
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| Strategy for Future Research Activity |
狂犬病抗原を用いて活性化させたリンパ球をELISpot assayにて検知できるように実験系を調節する。その上で、イヌに対してオーバーラッピングペプチドを用いた免疫を感作させ、survivin抗原のDLA-88 novel41型におけるエピトープの確認を行う予定である。また、DLA-88 novel41を発現した癌細胞株に対して、survivinの免疫を施したリンパ球を共培養し、癌細胞に対する傷害性を確認する実験を実施する予定である。
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Research Products
(1 results)
