2019 Fiscal Year Research-status Report
Establishment of cell polarity by interactions between Wnt and PCP factors.
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18K14720
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| Research Institution | National Institute for Basic Biology |
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Principal Investigator |
三井 優輔 基礎生物学研究所, 分子発生学研究部門, 助教 (70634129)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 平面細胞極性 / Xenopus / Wnt / イメージング / 超解像イメージング |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1. Wnt11がコアPCP因子に対してどのような影響を与えるのかを理解することは本研究の根幹である。これまでの知見を総合してコアPCP因子（Pk, Vangl, Fz, Dvlなど）が複合体を形成する際、同じ因子の組み合わせでもトポロジーの違い、すなわち同一細胞上（シス）の複合体と隣接細胞間（トランス）の複合体ではWnt11に対する反応が違うのではないかという仮説を立て、Xenopus胚での割球打ち分け実験で人為的にトポロジーを揃えて、Wnt11に対する応答を検討した。まだ予備的ではあるが、仮説を支持する結果が得られた。
2. コアPCP因子複合体のトポロジーを超解像イメージングなどにより直接解析することができれば、WntがコアPCP因子に及ぼす影響を理解できるのではないかと考え、その為の予備的解析を行った。当初計画していたstimulated emission depletion (STED)法は使用する際に野生型の胚では色素が焦げてしまうため、アルビノ胚に限られるという問題があり、やや使い勝手が悪いことが判明した。そこで別の超解像イメージングの手法として、新たに導入したspinning disc式共焦点顕微鏡を用いてsuper resolution radial fluctuation(SRRF)法を検討した。具体的には細胞膜トレーサーのmembrane-GFPもしくはmembrane-RFPのmRNAをXenopus胚の同一割球、あるいは別割球に顕微注入して、原腸胚、あるいは神経胚まで培養し、ホルマリン固定後SRRF法で観察を行った。その結果、同一細胞で発現させたmembrane-GFPとmembrane-RFPは大部分重なり、画像上でほとんど分離しなかったが隣接細胞で発現させたそれらの膜トレーサーは画像上で分離が認められた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
コアPCP因子に対するWnt11の影響の新たな仮説を支持する結果が得られ、また超解像イメージングのSRRF法に関しても予備的結果が得られたため。
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| Strategy for Future Research Activity |
引き続き、Wnt11がコアPCP因子に与える影響の仮説に関して定量的に検討を進める。
また今後SRRF法を用いて、コアPCP複合体の細胞膜上のトポロジーの解析を進める予定である。
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| Causes of Carryover |
顕微鏡のレンズ購入にあたり、型式選定に時間がかかったため。
次年度速やかに使用する予定である。
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Research Products
(5 results)
