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2020 Fiscal Year Research-status Report

Establishment of cell polarity by interactions between Wnt and PCP factors.

Research Project

Project/Area Number 18K14720
Research InstitutionNational Institute for Basic Biology

Principal Investigator

三井 優輔  基礎生物学研究所, 分子発生学研究部門, 助教 (70634129)

Project Period (FY) 2018-04-01 – 2022-03-31
Keywords平面細胞極性 / Xenopus / Wnt / イメージング / 超解像イメージング / PCP
Outline of Annual Research Achievements

1. Wnt11がコアPCP因子に対してどのような影響を与えるのかを理解することは本研究の根幹である。重要なことにアニマルキャップ領域でVangl2を過剰発現させると内在性のFz7が集積することを見出し、Fz7タンパク質が安定化されることが示唆された。このFz7がVangl2と同一細胞上なのか、隣接細胞なのかを割球打ち分け実験により検討したところ、同一細胞であることが示唆された(シス複合体)。更にこのようなシス複合体はWnt11の過剰発現により不安定化されることが示唆された。
2. コアPCP因子複合体のトポロジーを超解像イメージングなどにより直接解析することができれば、WntがコアPCP因子に及ぼす影響を理解できるのではないかと考え、新たに導入したspinning disc式共焦点顕微鏡を用いてsuper resolution radial fluctuation(SRRF)法を検討した。具体的には細胞膜トレーサーのmembrane-GFPもしくはmembrane-RFPのmRNAをXenopus胚の同一割球、あるいは別割球に顕微注入して、原腸胚、あるいは神経胚まで培養し、ホルマリン固定後SRRF法で観察を行った。その結果、同一細胞で発現させたmembrane-GFPとmembrane-RFPは大部分重なり、画像上でほとんど分離しなかったが隣接細胞で発現させたそれらの膜トレーサーは画像上で分離が認められた。このときの各トレーサーの画像上の重心位置を定量したところ、同一細胞での発現時、隣接細胞での発現時の間で統計的に有意な差が見られた。このことから今後コアPCP因子の複合体を解析するための重要な基礎データが得られた。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

Wnt11非存在化でのコアPCP因子の挙動について、新たな知見が得られたことと超解像イメージングについて、技術的進展が得られたことから、概ね順調に進展していると考えている。

Strategy for Future Research Activity

現在、Wnt11存在時のコアPCP因子の挙動、特に各因子間のトポロジーを理解することが最重要項目である。割球打ち分け実験と超解像イメージングを組み合わせて、コアPCP因子がどのような複合体を形成するか解析を進める。

Causes of Carryover

成果を公表するにあたり、引き続き解析が必要であることから2021年度も研究を継続して行う。このため、次年度使用額が生じた。

  • Research Products

    (6 results)

All 2021 2020

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results,  Open Access: 2 results) Presentation (3 results)

  • [Journal Article] Heparan Sulfate Proteoglycan Clustering in Wnt Signaling and Dispersal2020

    • Author(s)
      Mii Yusuke、Takada Shinji
    • Journal Title

      Frontiers in Cell and Developmental Biology

      Volume: 8 Pages: 631

    • DOI

      10.3389/fcell.2020.00631

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Improvement of Phycocyanobilin Synthesis for Genetically Encoded Phytochrome-Based Optogenetics2020

    • Author(s)
      Uda Youichi、Miura Haruko、Goto Yuhei、Yamamoto Kei、Mii Yusuke、Kondo Yohei、Takada Shinji、Aoki Kazuhiro
    • Journal Title

      ACS Chemical Biology

      Volume: 15 Pages: 2896~2906

    • DOI

      10.1021/acschembio.0c00477

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Heparan Sulfate Clusters Regulate Distribution and Signaling of Wnt Morphogens2020

    • Author(s)
      Mii Yusuke
    • Journal Title

      Trends in Glycoscience and Glycotechnology

      Volume: 32 Pages: E205~E211

    • DOI

      10.4052/tigg.2006.7e

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Presentation] Mutual interactions of Wnt11 and core PCP components organize PCP and spatial distribution of Wnt112021

    • Author(s)
      Yusuke Mii
    • Organizer
      遺伝研研究会 Wnt研究会2021
  • [Presentation] Wntによる平面細胞極性の方向づけの分子メカニズム2020

    • Author(s)
      三井優輔、高田律子、松山誠、高田慎治
    • Organizer
      第53回日本発生生物学会大会(誌上開催)
  • [Presentation] 平面細胞極性におけるWnt11の局在化メカニズムの解析2020

    • Author(s)
      鈴木美奈子、高田慎治、三井優輔
    • Organizer
      第43回日本分子生物学会年会

URL: 

Published: 2024-12-25  

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