2021 Fiscal Year Annual Research Report
Analysis of RhoA/Rho-kinase signals in neuronal circuit
| Project/Area Number |
18K14816
|
|---|
| Research Institution | Nagoya University |
|---|
Principal Investigator |
黒田 啓介 名古屋大学, 医学系研究科, 特任准教授 (80631431)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2022-03-31
|
| Keywords | シグナル伝達機構 / 神経科学 / Rho kinase / RhoA / 神経回路 / シナプス / 行動解析 / 細胞腫特異的 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
細胞内シグナル伝達機構を分子レベルで解明することは生命現象の理解に非常に重要である。しかしながら、脳はヘテロな細胞集団で構成されており、細胞種毎にその細胞内シグナルは異なるため、これまでの神経科学では、これらを個体内で個別に解析することは手間と費用の問題から現実的ではなかった。研究代表者は、細胞種特異的にCreを発現するトランスジェニック(Tg)マウスやアデノ随伴ウイルス(AAV)を組み合わせ、細胞種特異的なシグナル解析を迅速かつ詳細に個体内で行う実験系を確立している。
本研究では、特にRhoファミリー低分子量G蛋白質RhoAおよびその下流分子であるRho-kinaseシグナルについて個体内での細胞内シグナル伝達を解析した。RhoAおよびRho-kinaseの活性を制御するAAVを作製し、マウス脳側坐核に注入した際の発現を確認した。Rho-kinase(rock1, rock2)のダブルコンディショナルノックアウト(Rock1/2 dcKO)マウスを作製し、交配と繁殖を行った。AAV-RhoA/Rho-kinaseをマウス脳側坐核に注入したマウスや、Rock1/2 dcKOマウスを利用し、記憶に関わる行動実験を行った。いくつかの行動実験にて行動が変化した。AAV-RhoA/Rho-kinaseを注入したマウスや、Rock1/2 dcKOマウスのシナプス形態を観察し、RhoA, Rho-kinaseシグナルがシナプス形態の制御に関与していることを確認した。行動実験を行ったマウス脳側坐核からタンパク質ライセートを作製し、RhoAの活性化因子GEFや不活性化因子GAPについてリン酸化状態を検討した。いくつかのGEFやGAPにおいてリン酸化状態が変化していることを確認した。リン酸化抗体を作製しリン酸化状態が変化していることを確認した。
|
