新規ビタミンEエステル型プロドラッグによるNAFLDからNASHへの進展抑制効果

2021 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 18K14970
• Research Institution: Fukuoka University
• Principal Investigator: 渡瀬 大輔 福岡大学, 薬学部, 助教 (00580200)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: NASH

Outline of Annual Research Achievements

非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)の発症機序として、肝に中性脂肪(TG)沈着が起こり(First hit)、さらに肝障害を招く要因が加わる(Second hit)”Two hit theory”が広く支持されている。NASH治療法は未だ確立されていないが、近年トコトリエノール(T3)の有用性が報告されており、中でもγ-T3が注目されている。我々はこれまでに、本研究室で開発したγ-T3の水溶性エステル型プロドラッグ2R-γ-Tocotrienyl N,N-dimethylglycinate hydrochloride (γ-T3DMG)がin vitro及びin vivo脂肪肝モデルのTG量を有意に抑制すること、即ちFirst hitへの有効性を明らかにした。本年度は、TSODマウスを用いたin vivo及びin vitro NASHモデルによる研究を予定していたが、度重なる緊急事態宣言により長期間にわたる動物実験計画の見通しが立たなかった。そこで昨年度確立したにHepG2細胞を用いたin vitro NASHモデルを使って、γ-T3DMGのSecond hitへの有効性を引き続き検討した。
1. In vitro NASHモデルにおける肝線維化関連タンパク量の評価：HepG2細胞にパルミチン酸(PA)を添加48, 72時間後、炎症性サイトカインIL-8タンパク量は有意に増加した一方で、肝線維化促進性サイトカインTGF-β1のタンパク量は変化しなかった。
2. In vitro NASHモデルにおけるγ-T3DMGの効果：γ-T3DMG+PA添加群のIL-8タンパク量はPA単独添加群と比較して有意に低くなった。一方でTGF-β1のタンパク量に対しては影響がなかった。TGF-β1タンパク量は、上記の評価においても変化がみられなかったため、実験条件に関してさらなる検討が必要である。

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

度重なる緊急事態宣言の影響により時間を要する動物実験の見通しが立たず、前年度に引き続きマウスを用いたin vivo及びin vitro NASHモデルによる研究を実施することができなかった。代替実験として前年度に引き続きHepG2細胞にパルミチン酸を添加して作製したin vitro NASHモデルを用いて、γ-T3DMGによるNASH進展に対する効果評価を試みた。今現在、実験条件を再検討しながら本モデルを用いて脂質代謝関連因子及び肝線維化関連因子のmRNA量及びタンパク量をリアルタイムRT-PCR法及びウエスタンブロット法を用いてγ-T3DMGの有効性を評価中である。

Strategy for Future Research Activity

動物を用いたin vivo NASHモデルによる研究は評価期間が長期に渡るため、コロナ情勢により研究活動が制限される可能性を考えると、次年度も比較的短期間でも実施可能な細胞を用いたin vitro NASHモデルを用いた研究を中心に計画している。よってγ-T3DMGによるSecond hitへの有効性、即ちNASH進展抑制効果及びそのメカニズムの評価に関してはin vitro NASHモデルを中心に実施し、コロナ情勢を鑑みながらin vivo NASHモデルによる評価を並行して行っていく予定である。

Causes of Carryover

In vitro NASHモデルを用いてγ-T3DMGのSecond hitへの有効性が示唆されたが、度重なる緊急事態宣言の影響により研究活動が大きく制限されてしまったことで、NASH進展抑制メカニズムの詳細な評価が行えず、その研究費が次年度使用額となった。コロナの情勢次第ではあるが、今現在in vitro NASHモデルおけるγ-T3DMGの有効性の評価を中心に研究を進めながらin vivo NASHモデルによる評価も計画しており、次年度中に全て使用する予定である。